II.7.3 Évaluation quantitative de l'activité
antimicrobienne de l'huile essentielle du thymus vulgaris:
Détermination de la concentration minimale
inhibitrice CMI et la concentration minimale bactéricide CMB et
fongicide CMF.
L'évaluation quantitative de l'activité
antimicrobienne de l'huile essentielle de thymus, consiste à
déterminer la CMI et la CMB et CMF sur les microorganismes
(bactéries, levures) soumis aux contacts des huiles essentielles de
thymus, et ceci par la méthode de dilution en milieu solide en utilisant
des disques absorbants pour les bactéries et les champignons. La
méthode utilisée est celle de la dilution en milieu solide.
Préparation de l'inoculum :
L'inoculum est préparé par la même
méthode utilisée dans l'évaluation qualitative (la
méthode de diffusion sur le milieu gélosé)
[28].
Préparation de l'émulsion de l'Huile
Essentielle :
La solution mère d'HE doit être au 0,1/10 (1%). Elle
a été préparée dans M-H (pour les bactéries)
ou SAB (pour les champignons) additionnés de tween 80 Stérile et
maintenu en surfusion. Une série de dilution de chaque produit est
préparée à des concentrations allant de 1% à 0,03%
pour l'HE. La réalisation des dilutions se fit comme suite :
0,5 ml d'HE est dilué dans 50 ml de milieu M-H
(bactéries) ou SAB (champignons), maintenu en surfusion, dans un premier
flacon ce qui donne une dilution de 1% (solution mère) ; verser la
moitié du premier flacon (25 ml) dans un deuxième flacon et
ajuster avec
Chapitre II Méthodes et Matériels
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25ml de milieu pour la dilution 0,5% procéder de la
même manière jusqu'à l'obtention de la dernière
dilution de 0,03%. Les mélanges de chaque dilution sont
immédiatement repartis dans deux boites de Pétri rondes (90mm de
diamètre) à raison de 12,5 ml de milieu par boite. La gamme des
concentrations finales ainsi obtenue correspond à 1%, 0,5%,
0,25%, 0,125%, 0,0625%, 0,03%, 0,015%, 0,0078% [28].
Dépôt des disques de papier
filtre:
Après solidification, les disques en papier filtre
stériles de 6mm imbibé de la suspension bactérienne ou
fongique (champignons) sont déposés à la surface du milieu
gélosé contenant l'HE. Chacune boite a été
ensemencée par 2 bactérienne (Escherichia coli,
Staphylococcus aureus) dans le milieu M-H, et 1
Champignons (Candida albicans) dans le milieu SAB. Tous les essais
sont mis en incubation pendant 24 heures à 37°C pour les
bactéries et pendant 72 heures à 25°C pour
les Champignons. La lecture des résultats se fait visuellement par
l'observation de la croissance ou de l'inhibition des microorganismes
testés.
La CMI est définie comme étant la plus petite
concentration du produit pour laquelle aucune croissance n'est visible à
l'oeil nu pour les boites qui ne présentent pas de croissance. La CMB et
CMF ont été définies comme étant les plus faibles
concentrations de l'agent pour lesquelles il y a absence totale de colonies
après 24h de culture à 37°C pour les bactéries et
72heures d'incubation à 25°C pour le Champignon
[28]
].
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