Annexe 8: Mode opératoire du dénombrement
des germes totaux
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GIC JGEPROL
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Réf : MO.MAL003_DGT
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Révision : 00
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Mode opératoire du dénombrement des
germes
totaux.
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Date : Aout 2014
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I. Objet
Cette méthode est utilisée pour dénombrer
les germes totaux présents dans les échantillons.
II. Définitions
Cette technique est basée sur détermination de la
concentration des germes totaux contenus dans la préparation initiale.
Elle nécessite une ou plusieurs dilutions décimales (au
dixième) et une incubation à la température 30°C
III Principe
Un volume connu (1ml) de produit pur ou de dilution est
inoculée par incorporation dans un milieu strictement défini et
non sélectif (Plate Count Agar). On compte les colonies, après
étuvage à la température de 30°C pendant 48 à
72 heures. Cette méthode fait cependant subir aux microorganismes un
choc thermique au moment de l'incorporation de la gélose en
surfusion.
IV. Domaine d'application
Le laboratoire d'analyse contrôle qualité
V. Reference NFV08- 081
VI. Réactifs et produits
Eau peptoné tamponné Plate Count Agar (PCA)
Alcool
VII Matériel
Tube à essais
Boite de Pétri en verre Etuves
Bec de bunsen Pipette pasteur l'anse de platine Compteur de
colonie
REDIGE PAR : AWONO BITUNDE DIEUDONNE.P Page xi
REDIGE PAR : AWONO BITUNDE DIEUDONNE.P Page xii
CONTRIBUTION A LA MISE SUR PIED DU LABORATOIRE CONTROLE QUALITE
DU GIC JGEPROL
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GIC JGEPROL
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Réf : MO.MAL003_DGT
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Révision : 00
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Mode opératoire du dénombrement
des
germes totaux
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Date : Aout 2014
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VIII. Mode opératoire
> Effectuer un prélèvement du produit dans
les conditions strictement stériles.
> Diluer l' L'echantillon au 10-1 avec de l'eau
peptoné
> Prélever aseptiquement de chaque tube de dilution
1 ml de solution qu'il faut déposer dans une boite de Pétri
> Couler aseptiquement dans la même boite de
Pétri, environ 15 ml de milieux PCA maintenu en surfusion dans un
bain-marie (45° C) ; agiter doucement par des mouvements circulaires de la
main, dans un sens puis dans l'autre pour assurer un mélange de
l'inoculum et du PCA. Le milieu doit être coulé 10 min au plus
tard après inoculation des boites de Pétri
> Laisser solidifier le milieu sur la paillasse 15 à
45 min puis incuber à 30°C pendant 48 à 72 heures pour
dénombrer la flore aérobie mésophile.
> Lecture : Les colonies sont comptées à
l'aide du compteur de colonies ou du microscope
> IX. Interprétation des
résultats
Le comptage du nombre de colonies renseigne sur le respect ou
non de la norme
Il ne faut pas que le nombre d'UFC soit trop important (<
100 en cas d'agent de différenciation des colonies)
Les résultats seront rendus en écriture
scientifique avec deux chiffres significatifs La concentration
bactérienne dans le produit pur est de
3,0.10-1bactéries par mL. Cohérence inter-dilutions
(on attend un facteur 10).
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Volume de l'inoculum: 1 mL
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Nombre d'UFC
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1ère boîte
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1ère boîte
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Produit pur : 100
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> 100
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> 100
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Dilution 10-1
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104
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87
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Dilution 10-2
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20
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38
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Dilution 10-3
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6
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2
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On prend la dilution pour laquelle il y a le moins d'incertitude.
On tient compte ici de la dilution 10-1 : donc 85 bactéries
par mL à 10-1
CONTRIBUTION A LA MISE SUR PIED DU LABORATOIRE CONTROLE QUALITE
DU GIC JGEPROL
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