Contribution à la mise sur pied du laboratoire contrôle qualité du GIC Jgeprol.

Annexe 9: Mode opératoire du dénombrement des staphylocoques Aureus

GIC JGEPROL	Réf : MO.MAL00'_DSA	Révision : 00
	Mode opératoire du dénombrement des staphylococcus aureus.	Date : Aout 2014
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I. Objet

Cette méthode est utilisée pour dénombrer les staphylocoques présents dans les yaourts.

II. Définitions

Cette technique est basée sur détermination de la concentration des staphylocoques aureus contenus dans la préparation initiale. Elle nécessite une ou plusieurs dilutions décimales (au dixième) et une incubation à la température 37°C

III Principe

Après préparation de la solution mère et des différentes dilutions, un inoculum issu de chaque solution est déposé à la surface d'un milieu sélectif pour bactéries tel le milieu de Baird Parker. La présence des colonies présumées de Staphylocoques pathogène se traduit par la décoloration du milieu Baird Parker, et à la formation de colonies noires, bombées, rondes et entourées d'un halo d'éclaircissement. Ces colonies sont soumises alors aux essais de « pathogénicité », coagulase.

IV. Domaine d'application

Le laboratoire d'analyse contrôle qualité

V. Reference NF EN ISO 6888-2

VI. Réactifs et produits

Eau peptoné tamponné

Gélose de Chapman au mannitol

Alcool

Bouillon coeur-cervelle

VII Matériel

Tube à essais

Boite de pétri en verre

Etuves

Bec de bunsen

Pipette pasteur

l'anse de platine

Compteur de colonie

REDIGE PAR : AWONO BITUNDE DIEUDONNE.P Page xiii

CONTRIBUTION A LA MISE SUR PIED DU LABORATOIRE CONTROLE QUALITE DU GIC JGEPROL

GIC JGEPROL	Réf : MO.MAL004_DSA	Révision : 00
	Mode opératoire du dénombrement des staphylocoques aureus	Date : Aout 2014
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VIII. Mode opératoire

> Effectuer un prélèvement du produit dans les conditions strictement stériles.

> Diluer l' L'echantillon au 10^-1 avec de l'eau peptoné

> Couler 10ml de la gélose Baird Parker dans une boite de Pétri stérile et laisser prendre en masse 15 à 30 min sur la palliasse. Après solidification, ensemencer en surface avec 0,1 ml de la solution mère et des différentes dilutions. L'inoculum est ensuite étalé sur toute la surface à l'aide d'un râteau. L'incubation se fait à 37°C pendant 48 heures.

> Lecture : Les colonies de Staphylococcus aureus apparaissent sur le milieu, noires, bombées, rondes et entourées d'un halo d'éclaircissement

> Milieu d'enrichissement : Après incubation procédé aux prélèvements et

l'enrichissement des colonies suspecté d'être des staphylocoques aureus dans un tube contenant le milieu coeur cervelle. Puis Incuber à 37°C pendant 24h

> Test de coagulase : Mettre dans une cloche de Durham 0,5 ml du milieu d'enrichissement + 0,5ml de plasma humain, incubation à 37°C/5 à 24h. La coagulation du plasma confirme que c'est le germe staphylococcus aureus.

IX. Interprétation des résultats

La réaction est positive lorsque le plasma est coagulé et lorsqu'on peut retourner le tube même si cela s'accompagne d'un léger écoulement. Des réactions faiblement positives peuvent être obtenues.

TEST POSITIF

Volume de l'inoculum : 1mL	10^-1	10^-2	10^-3	10^-4	10^-5
Résultat	+	+	+	-	-

· Au moins 1 micro-organisme dans 1 mL de la dilution 10^-

Moins de 1 micro-organisme dans 1 mL de la dilution 10^-4 Moins de 10 micro-organismes dans 1 mL de produit pur.

Conclusion : Concentration en micro-organismes dans le produit pur comprise entre 10 ³et 10⁴ microorganismes par ml

TEST NEGATIF : le résultat des dilutions est négatifs dans tous les tubes

REDIGE PAR : AWONO BITUNDE DIEUDONNE.P Page xiv

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