Contribution à la mise sur pied du laboratoire contrôle qualité du GIC Jgeprol.

Annexe 7: Mode opératoire des dénombrements coliformes fécaux

GIC JGEPROL	Réf : MO.MAL002_DC	Révision : 00
	Mode opératoire du dénombrement des coliformes fécaux et coliformes totaux	Date : Aout 2014
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I. Objet

Cette méthode est utilisée pour dénombrer les coliformes fécaux et totaux présents dans les échantillons.

II. Définitions

Cette technique est basée sur détermination de la concentration des coliformes fécaux contenus dans la préparation initiale. Elle nécessite une ou plusieurs dilutions décimales (au dixième) et une incubation à la température 44°C pour les coliformes fécaux et 37°C pour les coliformes totaux

III Principe

Après préparation de la solution mère et des différentes dilutions, un inoculum issu de chaque solution est déposé à la surface du milieu sélectif Lactosée bilié au cristal, rouge neutre (VRBL) pour les coliformes. La présence des colonies présumées de coliformes fécaux et totaux se traduit par l'apparition de colonies rouge roses ou violettes avec une phase minimum de 0,5mm. Par la suite il est effectué un Test de confirmation sur BLBVB de la présence des coliformes.

IV. Domaine d'application

Le laboratoire d'analyse contrôle qualité

V. Reference NF EN ISO 4832

VI. Réactifs et produits

Eau peptoné tamponné

Lactosée bilié au cristal et au rouge neutre (VRBL)

Alcool

Bouillon Lactose Bilié au vert Brillant (BLBVB)

VII Matériel

Tube à essais

Boite de pétri en verre

Etuves

Bec de bunsen

Pipette pasteur

l'anse de platine

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CONTRIBUTION A LA MISE SUR PIED DU LABORATOIRE CONTROLE QUALITE DU GIC JGEPROL

GIC JGEPROL	Réf : MO.MAL002_DC	Révision : 00
	Mode opératoire du dénombrement des coliformes fécaux et coliformes totaux	Date : Aout 2014
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Compteur de colonie VIII. Mode opératoire

? Effectuer un prélèvement du produit dans les conditions strictement stériles. ? Diluer l' L'echantillon au 10^-1 et au 10^-2 avec de l'eau peptoné

? Faire un ensemencement en masse et en double couche de (0,1) ml des deux dilutions dans une boite de Pétrie, ajouter la gélose VRBL 14ml, après solidification, ajouter une deuxième couche (4ml), incuber à 44°C/24h, s'il y un développement les colonies apparaissent rouge roses ou violettes avec une phase minimum de 0,5mm.

Test de confirmation sur BLBVB (Bouillon Lactosée Bilié au Vert Brillant) :

? Repiquer les colonies à l'aide d'une anse de platine dans un tube contenant BLBVB(s/c) + cloche de Durham. Incuber à 44°C ou 37°C pendant 24h

IX. Interprétation des résultats

S'il y a trouble et dégagement de gaz, le test est positif

Volume de l'inoculum : 1mL	10^-1	10^-2	10^-3	10^-4	10^-5
Résultat	+	+	+	-	-

· Au moins 1 micro-organisme dans 1 mL de la dilution 10^-.Au moins 10³ micro-organismes dans 1 mL de produit pur

Moins de 1 micro-organisme dans 1 mL de la dilution 10^-4 Moins de 10 micro-organismes dans 1 mL de produit pur.

Conclusion : Concentration en micro-organismes dans le produit pur comprise entre 10 ³et 10⁴ microorganismes par mL.

10³ <[N] < 10⁴ micro-organismes par mL.

TEST NEGATIF

Volume de l'inoculum : 1mL	10^-1	10^-2	10^-3	10^-4	10^-5
Résultat	-	-	-	-	-

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