Annexe 6: Mode opératoire du dénombrement
des salmonelles
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GIC JGEPROL
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Réf : MO.MAL000_DS
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Révision : 00
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Mode opératoire du dénombrement
des
salmonelles.
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Date : Aout 2014
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I. Objet
Cette méthode est utilisée pour dénombrer
les salmonella présent dans les yaourts.
II. Définitions
Cette technique est basée sur détermination de la
concentration des salmonelles contenues dans la préparation initiale.
Elle nécessite une ou plusieurs dilutions décimales (au
dixième) et une incubation à la température 37°C
III Principe
Les salmonelles à dénombrer présentent
dans l'inoculum sont introduites soit à la surface, soit dans la masse
d'un milieu gélosé. Chaque bactérie isolée donne
naissance à une colonie ou UFC pour « unité formant colonie
». En effet, plusieurs bactéries peuvent être à
l'origine de la formation d'une seule colonie qui ne peut plus être
qualifiée de colonie (pas de clone) mais alors d'UFC
IV. Domaine d'application
Le laboratoire d'analyse contrôle qualité
V. Reference NF EN ISO 6579
VI. Réactifs et produits
Gélose de Hecktoen
Bouillon de Muller-Kauffman Eau peptoné tamponé
VII Matériel
Tube à essais Boite de Pétri Etuves
REDIGE PAR : AWONO BITUNDE DIEUDONNE.P Page vii
CONTRIBUTION A LA MISE SUR PIED DU LABORATOIRE CONTROLE QUALITE
DU GIC JGEPROL
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GIC JGEPROL
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Réf : MO.MAL001_DS
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Révision : 00
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Mode opératoire du dénombrement
des
salmonelles.
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Date : Aout 2014
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Bec de bunsen Pipette pasteur l'anse de platine
VIII. Mode opératoire
? Pré enrichissement non sélectif :
Dans un flacon, mettre 25g de produit, ajouter 75ml d'eau
peptoné (dilution1/4), incubation à 37°C/24h. Le reste de la
solution mère est récupéré pour être
incubé à 37°C pendant 16 à 20h.Cette incubation est
d'autant plus nécessaire qu'elle permet la culture des salmonelles
stressées.
? Enrichissement sélectif :
Ensemencer un tube contenant 10 ml de bouillon d'enrichissement
(SFB), avec un ml du milieu d'enrichissement (Müller Kauffman) bien
mélanger, incubation 37°C/16à18h. ? Isolement :
Prélever avec l'anse de platine une goutte du milieu
d'enrichissement qu'on semence en stries sur milieu sélectif (Hectoen)
puis incuber à 37°C/24h. Les salmonelles se développent sous
forme de colonies vertes ou bleutées avec ou sans centre noir
IX. Interprétation des
résultats
Après incubation, on observe ou pas aucun de
développement de salmonelles. Donc le produit a été
effectué dans des bonnes conditions
Expressions des résultats
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Volume de l'inoculum: 1 mL
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Nombre d'UFC
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1ère boîte
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2ère boîte
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Produit pur : 100
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Absent
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Absent
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Dilution 10-1
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Absent
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Absent
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Dilution 10-2
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Absent
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Absent
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Si il y a présence de microorganismes identifier le nombre
unité formant colonie
REDIGE PAR : AWONO BITUNDE DIEUDONNE.P Page viii
CONTRIBUTION A LA MISE SUR PIED DU LABORATOIRE CONTROLE QUALITE
DU GIC JGEPROL
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