3.2.1.2. Dosage de la Lp(a)
Comparaison de deux techniques analytiques
:I'immunonéphélémétrie et
l'électroimmunodiffusion.
L'immunonéphélémétrie
présente les avantages :
- d'être automatisée,
- facile à mettre en oeuvre,
- et d'avoir un domaine de mesure important (0,10
à 1,70 g/1).
Les inconvénients sont :
- impossibilité de doser les sérums
troubles,
- sensibilité à la taille de
l'analyte,
- nécessité de réaliser les dosages
sur sérums frais (il est fortement déconseillé
de
congeler les échantillons)
De plus le fabricant a mis en évidence, pour
certains échantillons, l'existence de
réactions non spécifiques obligeant
à effectuer un blanc pour chaque sérum. Si le
résultat du blanc dépasse une certaine
valeur, le fabricant conseille d'effectuer le
dosage par une autre méthode.
L'électroimmunodiffusion présente
les avantages :
- de pouvoir doser les sérums
troubles,
- d'être peu sensible à la taille de
l'analyte,
- d'autoriser la congélation des
échantillons avant dosage
- d'être bien adaptée aux petites
séries.
Les inconvénients sont :
-d'être entièrement manuelle,
- délicate à mettre en oeuvre, et
longue,
- d'avoir un domaine de mesure moins étendu (0,14
à 0,60 g/I) (Figure 25)
Nous avons tout d'abord comparé les
qualités de répétabilité, de
reproductibilité et testé les interférence analytiques de
chaque méthode. Puis nous avons comparé les résultats de
84 sérums dosés avec ces deux méthodes.
Thèse Docteur Pharmacie La lipoprotéine Lp(a) :
son intérêt dans l'interprétation du bilan lipidique Dr
GUIMONT MC 196/271 Lipides, Lipoprotéine (a),
Hyperlipoprotéinémie, Athérosclérose, Lipids,
Lipoprotein, Lpa, Hyperlipoproteinemia, Atherosclerosis
Répétabilité
La répétabilité de
l'immunonéphélémétrie a été
évaluée en dosant 10 fois de suite deux sérums
différents et en calculant les moyennes, les écarts types et les
coefficients de variation (C.V. = écart type / moyenne):
moyennes : 0,504 0,428
écarts types : 0,005 0,008
C.V.: 1,0 p.cent 1,8 p.cent
La répétabilité de
l'électroimmunodiffusion, très dépendante du manipulateur,
n'a pas été mesurée.
Reproductibilité
Elle a été évaluée sur les
sérums de contrôle respectifs de chaque technique :
|
Immunonéphélémétrie
|
Electroimmunodiffusion
|
|
n
|
16
|
16
|
|
moyenne (g/I)
|
0,410
|
0,403
|
|
ecart-type
|
0,0099
|
0,0131
|
|
coefficient de variation
(p.cent)
|
2,4
|
3,3
|
Interférences analytiques
Elles ont été testées selon les
protocoles établis par la Société Française de
Biologie
Clinique e. Ces protocoles
consistent à effectuer des surcharges d'un même
sérum
par:
- une solution de lipides pour alimentation
parentérale pour tester l'influence de
l'opalescence,
- une solution d'hémoglobine pour tester
l'influence de l'hémolyse,
- une solution de bilirubine pour tester l'influence de
l'ictère.
Les surcharges effectuées ont été
évaluées
- par la mesure d'indices d'opalescence et
d'hémolyse sur un automate de biochimie
(Hitachi 717, Boehringer)
- par le dosage de la bilirubine.
Les résultats montrent que l'opalescence du
sérum même minime, est très gênante
en immunonéphélémétrie
(résultats par excès) alors qu'elle n' a pas d'effet sur
les
résultats du dosage par
électroimmunodiffusion :
e Annales de Biologie Clinique, 1986, 44,
686-745
Thèse Docteur Pharmacie La lipoprotéine Lp(a) :
son intérêt dans l'interprétation du bilan lipidique Dr
GUIMONT MC 197/271 Lipides, Lipoprotéine (a),
Hyperlipoprotéinémie, Athérosclérose, Lipids,
Lipoprotein, Lpa, Hyperlipoproteinemia, Atherosclerosis
|
Opalescence
|
Immunonéphélémétrie
|
Electroimmunodiffusion
|
|
Tubes
(0 = sans
surcharge)
|
Indice
d'opalescence
|
Résultats des
dosages de Lp(a)
|
Indice
d'opalescence
|
Résultats des
dosages de Lp(a)
|
|
0
|
0
|
0,47
|
0
|
0,40
|
|
1
|
1
|
0,56
|
1
|
0,41
|
|
2
|
2
|
0,74
|
1
|
0,40
|
|
3
|
3
|
> 1,65
|
1
|
0,41
|
|
4
|
7
|
> 1,65
|
2
|
0,41
|
|
6
|
0,41
|
Pour les deux techniques, la présence
d'hémoglobine dans le sérum n'a pas d'incidence sur les
résultats des dosages.
Enfin, l'ictère (jusqu'à 400 pmol/I de
bilirubine) n'affecte pas les résultats obtenus avec
l'électroimmunodiffusion.
Figure 25 : Dosage de la Lp(a) par
électroimmunodiffusion
Thèse Docteur Pharmacie La lipoprotéine Lp(a) :
son intérêt dans l'interprétation du bilan lipidique Dr
GUIMONT MC 198/271 Lipides, Lipoprotéine (a),
Hyperlipoprotéinémie, Athérosclérose, Lipids,
Lipoprotein, Lpa, Hyperlipoproteinemia, Atherosclerosis
Corrélation des résultats de
patients
Nous avons procédé au dosage de la Lp(a)
de 84 sérums de patients par les deux
techniques.
Parmi ces 84 sérums, 13 ne sont pas utilisables
car présentent :
- en électroimmunodiffusion : une absence de
pic ou un pic trop petit pour être
mesuré,
- en néphélémétrie : un
résultat inférieur au seuil de détection (0,10 g/1). Un
des
13 sérums a donné un blanc
élevé.
Sur les 71 résultats restant, 6 ont
donné en néphélémétrie, un blanc
élevé, rendant le
résultat non exploitable. Au total, le
pourcentage de réactions non spécifiques par
néphélémétrie est, dans
cette série de 7 sur 83 (8,3 p.cent).
Il reste donc 65 couples de résultats
exploitables :
- moyenne par la technique
néphélémétrique = 0,379 g/I
- moyenne par la technique
d'électroimmunodiffusion = 0,372 g/I
Le coefficient de corrélation et
l'équation de la droite sont indiqués sur la figure
26.
n = 65
r = 0,9723
y = 0,9898x - 0,0031
0,00 0,20 0,40 0,60 0,80 1,00 1,20 1,40 1,60 1,80
2,00
Lp(a) (g!!), Néphélémétrie
2,00
1,80
c o
.5
1.60
3 1,40
o
1,20
E E
L1.1 0,80
0,60
â
- 0,40
0,20
0.00
Figure 26 : Dosage de la Lp(a), corrélation
entre la néphélémétrie
et
l'électroimmunodiffusion
On constate que les résultats des deux techniques
sont bien corrélés.
Nous avons fait le bilan des avantages et inconvénients
des deux techniques
|
Immunonéphélémétrie
|
Electroimmunodiffusion
|
|
Avantages
|
Inconvénients
|
Avantages
|
Inconvénients
|
|
Automatisation
|
OUI
|
|
|
NON
|
|
Répétabilité
|
< 5 p.cent
|
|
|
non testée
|
|
Reproductibilité
|
< 5 p.cent
|
|
< 5 p.cent
|
|
|
Interférences
|
|
|
|
|
|
Opalescence
|
|
+++
|
NON
|
|
|
Hémolyse
|
NON
|
|
NON
|
|
|
Ictère
|
|
non testée
|
NON
|
|
|
Réactions non spécifiques
|
|
OUI
|
NON
|
|
|
Conservation des échantillons avant
dosage
|
|
NON
|
OUI
|
|
|
Prix du test
|
|
plus onéreux
|
moins onéreux
|
|
Il est apparu que, pour notre activité,
l'électroimmunodiffusion présente plus d'avantages que
la néphélémétrie. Cette technique a
été retenue.
| 
