8- Effet des ions calcium
Les mesures de l'activité lipolytique sont
effectuées sur une émulsion d'huile d'olive et sur la tributyrine
en présence de concentrations croissantes en CaCl2 dans les
conditions optimales de pH et de température. En absence de calcium,
l'activité lipolytique est mesurée en présence de 10 mM
EDTA.
9- Effet du
détergent naturel sur l'activité lipasique
L'effet du NaDC sur l'activité lipasique a
été réalisé en mesurant l'activité de
l'enzyme sur la tributyrine ou l'huile d'olive comme substrat. Le test est
effectué dans les conditions optimales de température et de
pH.
10- Dosage des sels
biliaires dans l'hépatopancréas de crabe
C'est une méthode de dosage enzymatique qui se base sur
l'utilisation de 3á hydroxy stéroide
déshydrogénase (Sigma).
a) Préparation
de la solution (Enzyme/NAD+) au moment de l'expérience
Pour préparer une solution (Enzyme/NAD+)
avec une concentration diluée au 1/100 par rapport au stock soit 0.05
U/ml, on mélange 2 ml H20 contenant 2 mg NAD+
avec 2 ml tampon (30 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA , pH 9,4) contenant 0,2 U de
la déshydrogénase.
b) Dosage des
échantillons
On mélange 400 ul de
l'échantillon d'hépatopancréas dilué au 1/100 avec
600 ul de la solution d'enzyme préalablement préparée.
Après incubation de l'échantillon pendant 1 h à 37°C,
on mesure l'absorbance à 340 nm contre un blanc contenant 400 ul
d'échantillon et 600ul H20.
Une gamme étalon est préalablement
préparée dans les mêmes conditions avec des concentrations
de taurodéoxycholate de sodium variant de 0,005 à 0,5 mM.
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