3.2.8 Détermination du taux des
polyphénols totaux
3.2.8.1 Principe
Le dosage des polyphénols totaux est basé sur la
capacité de ces derniers à être oxydés par un
réactif de couleur jaune, constitué par un mélange d'acide
phosphotungstique et d'acide phosphomolybdique, appelé couramment
réactif de Folin-Ciocalteu. Lorsque les polyphénols sont
oxydés, ils réduisent ce réactif en un complexe ayant une
couleur bleue constitué d'oxyde de tungstène et de
molybdène. La coloration bleue produite, présente un maximum
d'absorption aux environs de 760 nm dont l'intensité est proportionnelle
aux taux des composés phénoliques présents dans
l'échantillon [21].
10
3.2.8.2 Protocole
Avant de commencer le test, plusieurs dilutions ont
été faites sur les échantillons, afin que les
résultats soient lisibles par le spectrophotomètre et ne
dépassant pas l'unité (inférieur à 1). Ensuite, 400
uL de réactif Folin-Ciocalteau ont été ajoutés dans
chaque extrait dilué. Le mélange a été mis à
l'obscurité pendant 10 minutes auquel on a ajouté ensuite 500 uL
de carbonate de sodium (NaNCO3). Après 30 minutes, l'absorbance a
été mesurée à 760 nm [22]. Cette opération a
été reproduite trois fois avec trois niveaux de dilution
différente :
- 25 uL de chaque extrait + 75 uL du l'eau distillée. -
50 uL de chaque extrait + 50 uL du l'eau distillée. - 100 uL de chaque
extrait.
Le matériel utilisé dans cette opération
sont illustrés dans la figure 12.
Figure 12 : Le matériel nécessaire
pour le dosage des polyphénols 3.2.8.3 Expression des
résultats
La concentration des polyphénols totaux a
été calculée à partir de l'équation de
régression de la gamme d'étalonnage, établie avec le
standard l'acide gallique.
3.2.8.4 Protocole de traçage de la gamme
d'étalon
Le traçage de la courbe de la gamme étalon a
été fait à travers des concentrations croissantes d'acide
gallique (0-10ug), additionné à 400 uL de FolinCiocalteu.
Après l'agitation de ces mélanges et une attente de 10 minutes,
nous avons ajouté 500 uL d'une solution de carbonate de sodium.
11
Après 30 minutes, l'absorbance a été
mesurée à ë=760 nm en utilisant un spectrophotomètre
UV-visible [22].
3.2.9 Détermination du taux des
flavonoïdes
3.2.9.1 Principe
La quantification des flavonoïdes a été
effectuée par spectrométrie avec le trichlorure d'aluminium
(AlCl3). En présence de trichlorure d'aluminium, les flavonoïdes
sont capables de former un complexe acide stable de couleur jaunâtre qui
présente un maximum d'absorption aux environ de 510 nm [23].
| 
