3.2.9.2 Protocole
Le protocole utilisé est basé sur celui
décrit par Dewanto et al, avec quelques modifications [24] :
Des volumes de 71 ul de solution de nitrite de sodium à
5% (m/v) et 150 uL de solution de chlorure d'aluminium à 10% (m/v) ont
été ajoutés à 250 uL de chaque échantillon.
Après 5 min d'incubation, le mélange a été mis en
contact avec 500 uL d'une solution de soude à 1 M. Le volume ainsi
obtenu a été ajusté à 1429 uL, puis agité
vigoureusement. L'absorbance a été mesurée à une
longueur d'onde de 510 nm contre un blanc constitué de 250 uL eau
distillée, 71 ul de solution de nitrate de sodium, de 150 uL de solution
de chlorure d'aluminium et de 500 uL de solution de soude.
3.2.9.3 Expression des résultats
Les résultats obtenus sont exprimés en
microgramme équivalent de quercitrine par millilitre d'extrait, en
utilisant l'équation de la régression linéaire de la
courbe d'étalonnage tracée de la quercitrine.
3.2.9.4 Protocole de traçage de la gamme
d'étalon
Le traçage de la courbe de la gamme d'étalon a
été réalisé à partir des concentrations
croissantes de quercitrine (0-160 ug), tout en appliquant, le même
protocole de dosage des flavonoïdes cité ci-dessus [24].
12
3.2.10 Détermination du pouvoir antioxydant
3.2.10.1 Principe
L'activité du balayage des radicaux libres a
été mesurée en employant le radical libre stable 2.2
diphenyl 1 picryl hydrazyl (DPPH). En présence des piégeurs de
radicaux libres, le DPPH, de couleur violette, se réduit en 2.2
diphényl 1 picryl hydrazine de couleur jaune [25].
3.2.10.2 Protocole
L'activité antiradicalaire des 8 échantillons
dilués a été évaluée selon la méthode
citée par Fattouch et al, en utilisant le réactif DPPH [26].
L'extrait a été préparé dans le
méthanol avec une concentration de 7,5 mg/mL. Puis, 25 uL de chaque
échantillon ont été ajoutés à 975 uL de la
solution de DPPH. Après 30 minutes d'incubation à
l'obscurité, les absorbances ont été mesurées
à 517 nm, contre un blanc constitué de 25 uL de méthanol
et 975 uL de DPPH. Pour chaque échantillon le test a été
répété 3 fois.
3.2.10.3 Expression des résultats
Les résultats sont exprimés en pourcentage
d'inhibition obtenu à partir de cette équation :
|
% I =
|
Do blanc - Do mélange Do blanc
|
X 100
|
Équation 1 : Formule du pourcentage
d'inhibition
Avec :
DO blanc : La densité optique du DPPH retrouvée
à 517 nm.
DO échantillon : La densité optique de chaque
échantillon retrouvé à 517 nm.
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| 
