Résultats et Discussion
35
Résultats et Discussion
1. Résultats
1.1. Analyse du profil génomique des phages par les
endonucléases sur gel d'agarose
L'analyse génomique par la digestion enzymatique montre
que les phages p T4, p Ebrios, p M3 et p M7 sont des phages à ADN double
brin car on a une apparition des bandes sur le gel d'agarose (Figure
7A, Annexe 4).
Les phages p Ebrios et p A5a provenant des eaux lagunaires sont
des phages à ADN, et montrent un profil après digestion aux
enzymes XbaI et XmnI (Figure 7, Annexe 4).
Les phages p M3, p M7 et p M11 issus de mammifères
montrent des profils différents. Ainsi, p M3 et p M7 sont des phages
à ADN, tandis que p M11 n'a revelé aucune bande après
digestion (Annexe 4). Le phage p T4 a été
positif pour la digestion aux enzymes de restrictions (Figure 7 et
Annexe 4 ; Tableau XI).
Les concentrations d'ADN obtenus après l'extraction, la
purification ont varié de 8,41 à 445 ng/uL, avec une moyenne de
276,18 ng/uL (Tableau XI).
36
Résultats et Discussion
Figure 7: Profil des phages après
digestion par des endonucléases
M : marqueur de poids moléculaire
GeneRuler 1 kb DNA Ladder;
(A) : Profil de digestion par XbaI :
Puits 1 : (p T4c ; Puits 2 : (p T4 b ; Puits 3 : (p A5a ;
Puits 4 : (p M3 ; Puits 5 : (p M7 ; Puits 6 : (p M11.
(B) : Profil de digestion par XmnI :
Puits1: (p Ebrios ; Puits 2 : (p A5a ; Puits 3 : (p M3 ; Puits
4 : (p M7 ; Puits 5 : (p M11.
Tableau X : Détermination du profil
génomique des phages
|
Désignation du
Phage
|
Concentration des
Acides
Nucléiques
(ng/uL)
|
Digestion enzymatique
(XbaI/XmnI)
|
Type Génome
(ADN/ARN)
|
|
(p T4c
|
46,90
|
+/+
|
dsDNA
|
|
(p T4b
|
8,41
|
+/+
|
dsDNA
|
|
(p Ebrios
|
265
|
+/+
|
dsDNA
|
|
(p A5a
|
369
|
+/+
|
dsDNA
|
|
(p M3
|
445
|
+/+
|
dsDNA
|
|
(p M7
|
356
|
+/+
|
dsDNA
|
|
(p M11
|
443
|
-/-
|
ND
|
+/+ : Profil de restriction positif d'une
digestion enzymatique par XbaI et XmnI, -/- : Profil de
restriction négatif de la digestion enzymatique par XbaI et XmnI.
dsDNA : ADN double brin,
ssDNA : ADN simple brin,
ssRNA : ARN simple brin, ND : Non
Déterminé
37
Résultats et Discussion
1.2.Analyse du profil génomique par la
méthode en champ pulsé
1.2.1. Analyse du profil génomique
généré par XbaI
Après la digestion des phages avec l'enzyme XbaI, les
résultats ont montré une diversité entre les 5 phages de
cette étude (Figure 8, Annexe 2), 10 bandes au niveau
du phage ö M7, 9 bandes pour les phages ö T4c et ö M11 ont
été observées. Par contre avec les phages ö Ebrios et
ö A5a, aucune bande n'a été observée.
Une analyse par le logiciel BioNumérics
(Applied Maths vesion 7.6 de 2017) a permis l'obtention de dendogramme
(Figure 9).
38
Résultats et Discussion
Figure 8 : Électrophorèse en champ
pulsé de bactériophage digéré par l'enzyme de
restriction XbaI
M1 : marqueur de poids moléculaire
spécifique du PFGE (0.13-194 kb) ; M : marqueur de
poids moléculaire GeneRuler 1 kb DNA Ladder;
Puits 1 : p T4b ; Puits 2 : p
T4c ; Puits 3 : p A5a ; Puits 4 : p A5a ;
Puits 5 : p Ebrios ; Puits 6 : p M3 ; Puits
7 : p M3 ; Puits 8 : p M7, Puits 9
: p M7 ; Puits 10: p M11 ; Puits 11:
p M11.
Figure 9 : Dendrogramme
généré par le logiciel Bionumerics® avec l'enzyme
XbaI
Elle montre la distance calculée par l'indice de
similarité de Jaccard, des profils PFGE des phages isolés par
l'enzyme XbaI. Le degré de similarité (%) est indiqué.
39
Résultats et Discussion
| 
