2.3.Dosage fluorimétrique
2.3.1. Principe
Le système Qubit(R) 3.0 utilise la technologie des
sondes fluorophores, qui contiennent des colorants qui ne fluorescent que
liées aux ADN, ARN et protéines. Cette spécificité
permet une quantification précise des acides nucléiques et non de
contaminants. Le système Qubit est sensible et peut être
utilisé même pour de faibles concentrations (10
ìg/ìL).
2.3.2. Protocole
Pour la réalisation du dosage, deux tubes d'analyse ont
été utilisés pour les standards (les étalons) et un
tube pour chaque échantillon. La solution de travail Qubit TM est
préparée en diluant le réactif Qubit TM 1 : 200 dans le
tampon Qubit TM. Un volume de 190 ìL du mélange (réactif
Qubit TM + tampon Qubit TM) est réparti dans les tubes à raison
de 10 ìL pour les solutions d'étalon et 195 ìL pour les
échantillons à doser plus 5 ìL d'extrait d'ADN. Ensuite,
la solution est mélangée au vortex pour une
homogénéisation suivie d'une incubation de 2 minutes à la
température ambiante. Après l'incubation, le test de dosage est
réalisé dans le fluoromètre Qubit® 3.0.
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