2. Méthodes
2.1. Concentration des bactériophages
2.1.1. Principe
La concentration des phages consiste à concentrer les
virus par l'intermédiaire de deux solutions:
le Polyéthylèneglycol (PEG 8000 à 40 %)
et le NaCl (5 M). Ce mélange va permettre au PEG de former un complexe
avec les cellules phagiques (Phage-PEG) et ce complexe est
précipité par centrifugation après incubation sur glace.
Le PEG est éliminé par le chloroforme pendant que les phages
demeurent intacts. Ensuite les phages sont détruits par du phénol
tandis que l'élimination des protéines phagiques a
été possible par l'ajout du mélange phénol /
chloroforme.
2.1.2. Protocole
Les phages ont été concentrés selon la
méthode de Kumari et al., 2009 avec
quelques
modifications. Ainsi, 3 mL de phages purifiés
(1010-1011 PFU/ mL) sont ajoutés à 400
ìL de NaCl 5 M, et 800 ìL de PEG 8000 à 40 % et
conservés à 4 O C pendant une nuit. Les précipités
recueillis après centrifugation (10 000 rpm / min pendant 10 minutes, 4
O C) sont remis en suspension dans 500 ìL de PBS 1X (pH 7,2). Le
mélange obtenu est traité avec un égal volume de
chloroforme-alcool-isoamylique (24: 1) puis centrifugé à 9000 rpm
/ min pendant 2 minutes ; ce qui permet d'éliminer le PEG 8000 et les
débris cellulaires de la suspension
bactérienne.
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