Activité anti drépanocytaire et stabilité physico-chimique des anthocyanes extraits des bulbes d'hypoxis angustifolia et des feuilles d'ipomoea batatas

Chapitre II

MATERIELS ET METHODES

II.1.Récolte et conditionnement du matériel végétal

Le matériel végétal constitué des bulbes d'Hypoxis angustifolia a été récolté à SANGA MAMBA dans la commune de NGALIEMA et celui des feuilles d'Ipomoea batatas a été récolté à MATADI MAYO dans la commune de Mont NGAFULA.

Ces échantillons récoltés ont été identifiés à l'herbarium de l'institut national des études et recherches agronomiques (INERA) situé au département de biologie à la faculté des sciences de l'université de Kinshasa.

Les échantillons ont été séchés à la température du laboratoire à #177;27°C pendant deux semaines puis pulvérisés au broyeur de marque Warning commercial (Moulinex).

II.2.Screening chimique

Dix grammes de poudre sont macérés dans 100 ml d'eau distillée pendant 24 heures, puis filtrés. Le filtrat constitue l'extrait aqueux.

Dix gramme de poudre sont macérées dans 50 ml de méthanol pendant 24 heures. Après filtration on recueille un filtrat organique.

II.3. Extraction des anthocyanes

Pour extraire les anthocyanes, nous avons pesé séparément 100 g de poudre à l'aide d'une balance dans chacun des deux échantillons que nous avons ensuite macéré dans 500ml de méthanol acidifié à 1% avec HCl pendant 48heures à la température ambiante. Les macérés obtenus ont été filtrés plusieurs fois puis delipidés au du n-hexane et les extraits anthocyaniques obtenus ont été séché à l'étuve à 40°C pendant 48 heures. Le schéma II-1 suivant donne la procédure d'extraction des anthocyanes.

Poudre des feuilles d'Ipomoea batatas ou d'Hypoxis angustifolia

Macération dans le méthanol acidifié (HCl 1%) pendant 48 heures

Filtration plusieurs fois avec des papiers filtres

Filtrat

Marc à écarter

Concentration du filtrat à l'évaporateur rotatif

Délipidation dans le n-hexane

Phase n-hexanique à écarter

Phase méthanolique

Séchage du concentré à l'étuve à 40°C

Extrait d'anthocyanes

Schéma II-1 : Schéma d'extraction des anthocyanes

II.4. Activité biologique

Les solutions d'extraits totaux (1mg/ml) sont préparées en dissolvants 5mg d'extraits totaux dans 5 ml d'eau physiologique (NaCl 0,9%).

Pour chaque solution d'extraits, on confectionne les préparations microscopiques en mélangeant respectivement une goutte de sang, une goutte de méta-bisulfite de sodium (Na₂S₂O₅) à 2% et une goutte de la solution de drogue.

Cette préparation est recouverte par une lamelle, et les bords des lamelles sont enduits avec de la paraffine en surfusion en vue de créer les conditions d'hypoxies (MPIANA et al, 2007a, 2007b  MPIANA et al, 2010b, 2010c, 2010d).

Après incubation, les différentes préparations sont examinées au microscope optique de marque L1200B, au grossissement 40X puis digitalisées à l'aide d'un appareil photographique de marque SAMSUNG/6.O MEGA PIXELS.