Maà®trise de la qualité des eaux dans les industries agro-alimentaires : cas de la Sobebra.

2.2.3.2. Analyses microbiologiques

Nous avons déterminé deux paramètres microbiologiques sur les eaux de process.

· Escherichia Coli et Coliformes totaux

Les coliformes totaux sont des indicateurs de pollution d'origine organique d'eau potable. Une eau traitée ne devrait pas contenir de coliformes totaux, mais leur présence ne constitue pas un risque immédiat pour la santé. Pour sa part, Escherichia Coli (E. coli) est un indicateur de pollution d'origine fécale humaine ou animale. La présence de ce microorganisme dans les eaux de consommation constitue un risque. Les nouveaux règlements sur la qualité de l'eau recommandent la recherche de bactérie E. coli comme indicateur sanitaire de la qualité de l'eau potable et permettent l'utilisation de méthodes d'analyse de type présence/absence. [11(*)]

La méthode utilisée dans le cadre de nos études est celle de la filtration sur membrane. Le milieu de culture utilisé est le Milieu Endo agar référence : Merck 1.04044. 500g. Pour la filtration, nous avons utilisé une rampe de filtration en acier inoxydable de 6 postes de filtration connectés avec une pompe à vide. Nous avons aussi utilisé les Membranes de 0,45um de porosité et les boîtes de pétri de 55mm de diamètre.

Déroulement de l'analyse :

- stériliser tous les éléments du filtre en inox avec l'alcool et à la flamme du brûleur portatif ou du bec bunsen et laisser tiédir ;

- enlever l'entonnoir et déposer très rapidement la membrane sur son support à proximité de la flamme du bec bunsen et fixer l'entonnoir ;

- verser dans la zone de sécurité de la flamme du bec Bunsen 100mL de l'échantillon d'eau dans l'entonnoir ;

- mettre en marche la pompe à vide ;

- ouvrir le robinet du poste concerné ;

- la filtration terminée, arrêter la pompe à vide ;

- enlever l'entonnoir et prendre de façon stérile (dans la zone de sécurité de la flamme du bec bunsen) la membrane à l'aide d'une pince inox stérile ;

- déposer la membrane dans la boîte de pétri précoulée toujours dans la zone de sécurité de la flamme du bec de bunsen ;

- mettre les indications nécessaires à l'identification de la boîte ;

- à la fin de l'opération, retourner les boîtes de pétri et les ranger soigneusement dans l'incubateur à 35°C ;

- faire la lecture après 24 heures d'incubation.

· Bactéries aérobies revivifiables à 22°C et à 37°C

La recherche et le dénombrement des microorganismes aérobies revivifiables permettent de dénombrer les bactéries se développant dans des conditions habituelles de culture et représentent la teneur moyenne en bactéries d'une eau. Ces germes n'ont pas d'effet direct sur la santé mais sous certaines conditions, ils peuvent générer des problèmes. Pour une eau de production, les valeurs de référence sont : < 20 UCF à 22°C et < 2 UCF à 37°C. [12(*)]

La méthode utilisée dans le cadre de nos études est celle de l'incorporation à la gélose. Le milieu de culture utilisé est le milieu Standard Agar référence : Sartorius 14131. Les boîtes de pétri utilisées sont des boîtes de pétri de 55 mm de diamètre.

Déroulement de l'analyse

- faire fondre au préalable le milieu Standard Agar dans le bain-marie à 95°C ;

- laisser refroidir un peu (50°C) afin d'éviter la condensation de la vapeur dans la boîte de pétri de diamètre 55mm et de tuer les microorganismes avec un milieu trop chaud ;

- couler 1 mL de l'échantillon dans la boîte de pétri ;

- Couler environ 10 à 15 mL du milieu dans la boîte de pétri et refermer ;

- déposer les boîtes coulées sur une surface plane et homogénéiser en les tournant dans les deux sens ;

- laisser se solidifier. Après parfaite solidification, recouvrir de nouveau une couche.

- Retourner les boîtes et les incuber à cette position lorsque la dernière couche est solide à l'étuve de 37^oC ;

- Toutes les opérations sont faites dans la zone de sécurité de la flamme du bec de bunsen.

La limite de détection pour cette méthode est de 1 UFC (unités formant des colonies) par mL.

* 11 : Centre d'expertise en analyse environnementale du Québec : MA. 700 - ECCTMI 1.0 Édition : 2000-04-06 Révision : 2005-05-30 (2).

* 12 : ISO 6222 A MIC_EA_01bEau Dénombrement des microorganismes revivifiables à 37°C cfu/mL.