Thermorésistance de trois serotypes de salmonella dans l'oeuf et les gesiers de poulets

II-2-3 - ETUDE DE LA THERMORESISTANCE DE TROIS SOUCHES DE SALMONELLES

La thermorésistance de trois serotypes de salmonelles (S. Hadar, S. Enteritidis et S. Typhimurium) est étudiée dans un bouillon de culture, dans l'oeuf entier et dans des gésiers après contamination de ces différents produits.

Préparation de l'inoculum

Des essais préliminaires ont été effectués pour standardiser le protocole de préparation de l'inoculum. Le protocole retenu se présente comme suit :

ü Prélever une colonie de la souche qu'on barbotte dans 10 ml d'EPT

ü Mettre au bain marie à 37°C pendant 3 heures.

ü Pour obtenir une suspension de 10⁶ bactéries /ml, on prélève 0,3 ml qu'on introduit dans 10 ml d'eau distillée stérile

ü Pour obtenir une suspension de 10⁸ bactéries/ml, on prélève 7,6 ml du bouillon qu'on introduit dans 5 ml d'eau distillée stérile.

II-2-3-1- EN BOUILLON DE CULTURE  

La suspension préparée est repartie en raison d'un millilitre (1ml) dans les tubes capillaires scellés à la flamme du bec bunsen. Ces différents tubes contenant la suspension sont placés au bain marie préalablement réglé à la température choisie pour l'étude de la thermorésistante. Le premier tube est retiré après une minute d'incubation et les autres tubes vont être retiré à intervalle de deux minutes jusqu'au dernier tube. Chaque tube retiré est plongé dans un bain de glace pour le refroidir et ensuite pour arrêter la croissance microbienne.

Nous nous sommes servis d'une scie pour découper les tubes capillaires et le contenu est ensemencé avec une gélose nutritive (TCSA). Les boites de Pétri ensemencés sont mis à l'incubateur à 37°C pendant 24H.

II-2-3-2- DANS UN OEUF ENTIER

Nous avons prélevé 0,3mL du bouillon (inoculum) qu'on introduit dans un tube à vis contenant 10ml d'un oeuf entier frais. L'oeuf entier est contaminé à 10⁶ bactéries/ml. Avec une pipette stérile nous avons repartit 1ml de l'oeuf contaminé dans chaque tube capillaire scellé pour ensuite le soumettre à l'effet de la température au bain marie. Les tubes seront retirés et placés au bain de glace pour ensuite les casser puis l'ensemencement de leur contenu se fera avec la gélose TCSA. Les boites de Pétri seront incubés à la température de 37°C pendant 24 Heures afin de suivre quantitativement la destruction de la Salmonelle au cours du temps par l'effet du traitement thermique appliqué.

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II-2-3-3- DANS LES GESIERS DE POULET

Plusieurs échantillons de gésiers non cuits achetés sur les marchés à Cocody ont été broyés et mélangés dans un récipient, puis stérilisés dans l'autoclave à 121°C pendant 15mn.

Afin de s'assurer de la stérilité du produit, un dénombrement total des germes a été effectué suivant la méthode NF ISO 4833. Ainsi 1g de gésier stérilisé a été prélevé et mis dans 9ml d'eau peptonée. Après 1 h de décantation, 1ml du liquide surnageant a été étalé sur de la gélose nutritive et incubé à 30°C pendant 48h pour dénombrement.

Le gésier stérilisé a été inoculée par 3% de la suspension mère d'inoculum. Elle a été par la suite agitée pendant 5mn puis répartie dans des tubes en verre à raison de 1g chacun. Chaque tube contient environ 10⁶ bactéries/g.

Les tubes ont subi par la suite un traitement thermique à l'aide d'un bain-marie. Ils ont été prélevés à intervalles de temps prédéterminés puis analysés afin de suivre quantitativement la destruction de la salmonelle au cours du temps par l'effet du traitement thermique appliqué.