9.4.3. Test de mannitol-mobilité à
37°C
Il a pour but de différencier rapidement les
entérobactéries, l'agar Mannitol-Mobilité permet
de chercher simultanément la mobilité l'utilisation de mannitol
et la réduction des nitrates.
On ensemence aseptiquement la suspension bactérienne
par piqure centrale et profonde au moyen d'un fil de platine sur l'agar
Mannitol-Mobilité en tube à essai.
9.4.4. Test du citrate perméase à
37°C
Il a pour but de mettre en évidence le citrate
perméase chez la bactérie suspecte.
Il s'agit de déterminer si un micro-organisme est
capable ou non de dégrader la citrate qui est le premier composant
intervenant dans le cycle de kreps (métabolisme de glucide) et son
utilisation indique le fonctionnement probable de ce cycle dans le germe
étudié.
On réalise aseptiquement à l'aide d'une ance un
ensemencement en stries de suspension bactérienne sur la tranche du
milieu Citrate de Simmons en tube à essai.
9.4.5. Test à l'oxydase
Sous l'action d'une cytochrome-oxydase, le
di-méthyl-para-phénylène diamine, incolore, est
transformé en une semi-quinone violacée qui s'oxyde rapidement
pour donner un composé noirâtre.
- Réactif (à conserver à + 4°C et
à l'obscurité)
Solution aqueuse à 1% de chlorhydrate ou d'oxalate de
di-méthylpara- phénylène diamine dont on imbibera un
papier buvard blanc. Ou disques de papier buvard imprégnés de
cette substance dans le commerce.
CHAPITRE II
MATERIELS ET METHODES
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- Placer le disque Ox sur une lame porte-objet et l'imbiber avec
une goutte d'eau.
Prélever à la pipette boutonnée une
parcelle de culture et la poser sur le disque. La présence d'oxydase
entraînera une coloration violette.
9.4.6. Test à l'ONPG (Orthonitrophényl
-D-Galactopyranoside)
Le test à l'ONPG est une technique basée sur
l'action directe de l'enzyme sur une molécule
chromogène pouvant être
l'ortho-nitrophényl- -D-galactopyranoside ou le 2-naphtol- -
Dgalactopyranoside (Carbonnelle et al., 1987).
préparer une suspension épaisse de
bactéries prélevées obligatoirement sur milieu
lactosé dans 0,25 ml d'eau distillée en tube à
hémolyse Ajouter 0,25 ml de solution d'ONPG ou un disque
imprégné d'ONPG prêt à l'emploi (ou encore un
demi-disque) (Farmer et al., 1980). Le test de l'ONPG
(analogue de lactose) a pour but de faire éclater les bactéries
par choc osmotique dans de l'eau distillée stérile. Dans ces
conditions l'enzyme, si elle existait dans la bactérie est
libérée dans le milieu et réagit avec l'ONPG
entraînant un changement de couleur. Dans le cas contraire un test
négatif confirme que la souche était effectivement
dépourvue de béta-galactosidase.
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