9. Recherche des salmonelles
La recherche des Salmonelles s'effectue plusieurs
étapes : 9.1.Pré enrichissement non
sélectif
L'un des deux flacons de la solution mère (25g de
viande préalablement broyée +flacon de TSE de 250ml) est
incubé pendant 24h à 37°C et va être utilisé
pour la Recherche des salmonelles (Dennaï et al.,
2001).
9.2.Enrichissement à 37°C
Le lendemain, dans des conditions d'asepsie un enrichissement
est effectué sur le bouillon SFB (bouillon d'enrichissement
sélectif), en simple et en double concentration additionné
d'acide de sodium (pour SFB S/C et SFB D/C), et repartie à raison de
100ml par flacon, soit :
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100ml (du milieu incube au 1er jour) pour le SFB
D/C.
CHAPITRE II
MATERIELS ET METHODES
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100ml (du milieu incube au 1er jour) pour SFB S/C.
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9.3.Isolement à 37°C
Sur le milieu sélectif salmonella-shigella
(permettant l'isolement et la différenciation des
entérobactérie pathogènes), à partir de chacun des
milieux d'enrichissements (S/C et D/C) précédents, on effectue
aseptiquement des isolements par des ensemencements en stries au moyen d'une
anse de surface du milieu salmonella-shigella avec leur additif
préalablement coulé en boites pétri et solidifié
(Dennaï et al., 2001).
9.4.Lecture des boites et caractérisation des
suspects
A partir des boites de salmonella-shigella
incubées précédemment, on prépare
aseptiquement une suspension bactérienne en mettant cinq colonies
considérées comme typique (blanchâtre avec ou sans centre
noir) dans 5ml d'eau physiologique stérile qu'on incube quelque heures
à 37°C. Cette suspension servira à la réalisation des
tests confirmatifs et biochimiques qui se déroule comme suit :
9.4.1.Test d'urée-indole
Nous avons introduit environ 1 ml de ce milieu dans un tube
à vis stérile. Par la suite nous l'avons ensemencé avec
une souche pure, prélevée sur gélose
salmonella-shigella. Après incubation à 37°C
pendant 24 heures, une lecture est faite.
La couleur du milieu reste inchangé pour les souches
suspectes, et sont dites uréase négative (non productrices
d'uréase). Dans le cas contraire, il vire au rose.
Pour la mise en évidence de la production d'indole,
nous avons ajouté quelque goutte du réactif de Kovacs dans les
tubes du milieu urée-indole. La dégradation du tryptophane est
marquée par l'apparition d'un anneau jaune, pour les salmonelles
qui sont dites indole négatif.
Dans le cas contraire, nous avons un anneau rouge (Indole
positif) (Farmer et al., 1980).
CHAPITRE II
MATERIELS ET METHODES
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9.4.2.Test de TSI à 37°C
Il a pour but l'identification rapide des
entérobactéries, la gélose TSI permet de mettre en
évidence la fermentation du lactose ou de glucose (avec ou sans
dégagement gazeux), du saccharose et la production d'hydrogène
sulfuré (H2S), a l'aide d'un fil de platine, on ensemence aseptiquement
la suspension bactérienne par piqure au fil droit et en stries sur la
tranche de la gélose TSI inclinée en tube à essai
(Yazgi, 2002).
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