9.4.7. Coloration de Gram
Elle pour but la taxonomie ou la classification
bactérienne. Cette technique reposant sur les caractéristiques
membranaires et de parois des bactéries (Guezlane,
2008). Cette coloration se traduit par les étapes suivantes
:
· Réaliser un frottis bactérien: sur une
lame propre on dépose une goutte d'eau distillée, puis à
l'aide de l'anse à ensemencement on prélève un peu de la
crème bactérienne (culture jeune), on sèche la lame avec
la flamme bleue du bec bunsen et on la fait passer deux à trois fois au
sein de la flamme.
· Colorer au violet de gentiane (1 minute): est un
colorant basique qui se fixe sur les composants du cytoplasme bactérien,
à ce moment toutes les bactéries sont de couleur violette. Laver
à l'eau distillée.
· Mordançage au lugol (30 secondes): est un
mordant qui renforce l'adhésion du violet de gentiane au niveau du
cytoplasme bactérien. Laver à l'eau distillée.
· Décoloration rapide avec de l'éthanol
à 95° (10 secondes): les bactéries Gram ont une paroi mince
et riche en lipide, ce qui permet le passage de l'alcool qui va entraîner
avec lui le
CHAPITRE II
MATERIELS ET METHODES
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violet de gentiane et les cellules vont devenir transparentes.
Laver rapidement avec de l'eau distillée.
· Colorer avec la fuchsine (1minute): cette étape
sert à colorer les bactéries (Gram-) qui se sont
décolorées lors du traitement précédent, de ce fait
les bactéries Gram- seront colorées en rose et les Gram+ en
violet. Laver à l'eau distillée.
Après séchage de la lame observer avec l'ajout
d'huile à immersion (objectif xl00).
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