3) Préparation de la matière sèche
:
a) Prétraitement :
Les échantillons récoltés sont
traités au laboratoire par lavage et nettoyage à l'eau courante
afin d'éliminer toutes les impuretés possibles (sels, sables,
coquilles, etc.)
? Taille et teneur en eau :
La taille des thalles de Laminaria digitata mesuré par
une règle (stipe et lame) varie de 20 à 30 cm ce qui correspond
environ à un âge de 2 ans. Celle des thalles de Fucus vesiculosus
varie de 7 à 13 cm et sont alors considérés en stade
jeune. La teneur en eau est évaluée par séchage à
l'étuve réglée à la température 80°C
pendant trois jours. Le pourcentage en eau est calculé comme suit :
poids frais - poids sec / poids frais x100 (Annexe
2) [10]
La biomasse des deux algues est conservée au
laboratoire par séchage à température ambiante.
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b) Principe
La méthode la plus courante pour déterminer la
teneur en alginates d'une algue, consiste à les extraire à chaud
par solubilisation alcaline puis les précipiter pour les quantifier par
pesée. (Fig a) L'extraction des alginates est réalisée
à chaud ou "Hot Extract" à 90°C
Le traitement à chaud sert a dégrader la paroi
cellulosique et mettre les alginates en contact direct avec le milieu
réactionnel.
Les carbonates de Na ont trois fonctionnalités
? la solubilisation des alginates par
désagrégation des liaisons entre les alginates et les autres
constituants de la paroi
surtout les protéines grâce au pH alcalin
? la formation des alginates de Na
? et la précipitation des ions alcalino-terreux.
Un pH trop acide ou trop basique peut détruire les
molécules d'alginates par hydrolyse.
Et avec l'incorporation de l'éthanol les alginates
s'agglomèrent sous forme de gel flottant à la surface de la
solution.
c) Extraction et purification des alginates:
L'extraction des alginates est réalisée à
chaud ou "Hot Extract" à 90°C(fig 18), à un pH alcalin (pH
10) par addition d'un volume d'une solution aqueuse 0,5M de NaHCO3(fig 17). A
un
tel pH, le rendement d'extraction des alginates est encore
meilleurs [1] [15] [21].
Les différentes étapes de
l'extraction et du dosage sont illustrées par les photos suivantes :
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