VIII.2. Diagnostic indirect
VIII.2.1.Centrifugation en gradient de saccharose
L'ultracentrifugation en gradient de densité de
saccharose a permis la séparation des immunoglobulines (IgG et IgM) et
de résoudre le problème chez la femme enceinte ayant en
début de grossesse une suspicion de contamination rubéoleuse
(signes cliniques et/ou anticorps à titre élevé). La
présence d'IgM spécifique de la rubéole dans le sang du
sujet indique qu'il y a une affection récente, alors que leur absence
est en faveur d'une réponse du type secondaire chez un individu
anciennement protégé. En plus des IgM, il y a habituellement
présence d'IgG à titre supérieur.
La valeur de cet examen apparaît certaine, mais les IgM
n'étant pratiquement plus décelables après un mois, dans
le sang de la femme ne doit pas excéder cette valeur si on veut disposer
de résultats interprétables ( Maurin et al., 1973).
VIII.2.2. Mesure de l'avidité spécifique des
IgG
La mesure de l'avidité des IgG peut aider à dater
l'infection (Picone et al., 2005).
On a montré que le test d'avidité des IgG est
utile pour différencier entre une récente ou ancienne infection
de la rubéole ou une réinfection, elle est
particulièrement utile pour étudier la rubéole chez les
femmes enceintes (Mubareka et al., 2007).
VIII.2.3. ELISA (Enzyme-Linked-Immuno Sorbent Assay)
Les techniques d'ELISA (Enzyme-Linked-Immuno-Sorbent-Assay)
sont des techniques sensibles et faciles à réaliser. La
stabilité du virus (stabilité génétiques) fait que
ce test sérologique est fiable (Ellakhdi et al., 2009).
La technique a été appliquée avec
succès pour la détection des anticorps spécifiques de la
rubéole.
? Presque les kits ELISA IgG spécifiques pour la
détection de la rubéole sont tous disponibles dans le commerce et
de type indirect, en utilisant l'antigène (Ag) de la rubéole
fixé à une phase solide (microplaque de polystyrène des
plaques ou des billes en plastique). La source de l'antigène (peptide,
l'antigène du virus recombinant ou entier) affecte la sensibilité
et la spécificité du test. Après le lavage et
l'élimination des antigènes non liés, le sérum
dilué est ajouté et incubé avec l'antigène
immobilisé. Les anticorps spécifiques de la rubéole
présents dans le sérum se lient à l'antigène.
Ensuite, les anticorps non liés sont éliminés par
lavage
ISTMT-IPT 2012-2013
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et un anti-IgG humain conjugué à enzyme est
ajouté pour l'incubation. La quantité du conjugué qui se
lie à chaque puits est proportionnelle à la concentration de
l'anticorps de la rubéole spécifiques présents dans le
sérum du patient. Les plaques sont ensuite lavées et le substrat
est ajouté, il en résulte un développement de la couleur.
La réaction enzymatique est arrêtée après une courte
période d'incubation, et la densité optique est mesurée
par un instrument lecteur ELISA.
? Les kits ELISA IgM disponibles dans le commerce pour la
détection des IgM contre la rubéole spécifiques sont
principalement de deux types:
A. ELISA indirecte: Le principe de l'essai a
été décrit ci-dessus pour la rubéole IgG, sauf pour
l'utilisation de l'enzyme et l'anti-IgM humain étiqueté comme
conjugué. Dans cet essai, des résultats faux négatifs
peuvent se produire en raison d'une concurrence dans le dosage entre les
anticorps IgG spécifiques avec une forte affinité, tandis que
l'IgM spécifiques à une plus faible affinité pour
l'antigène.
B. ELISA IgM de capture: Dans ces essais
l'anticorps anti IgM humain est fixé à la phase solide pour la
capture des IgM sériques. L'antigène du virus de la
rubéole est lié à un anticorps marqué par une
enzyme pour détecter le complexe anticorps-antigène. Ce type
d'essai permet d'éliminer la nécessité d'un
prétraitement de l'échantillon avant le dosage (Mendelson et
al., 2006).
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