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VIII. Diagnostic
La recherche du virus de la rubéole ne se fait que
dans les laboratoires de virologie de haute technologie, elle est
limitée au diagnostic anténatal. Elle s'effectue soit par
isolement sur culture cellulaire soit par technique RT-PCR simples ou
multiplex.
Le diagnostic sérologique repose soit sur la
présence d'IgM antivirus de la rubéole sans ou avec les IgG soit
sur la séroconversion ou ascension du titre des anticorps IgG ou totaux.
La recherche des anticorps anti rubéoliques fait appel au titrage des
anticorps par inhibition de l'hémagglutination, méthode ELISA
indirecte ou immunocapture qui permet la différenciation entre les IgG
et IgM. La détermination de l'avidité est aussi appliquée
au
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laboratoire spécialisé pour faire la
différence entre la primo-infection (infection acquise) ou
réinfection (Gaudelus, 2008).
VIII.1.Diagnostic direct
VIII.1.1. Recherche du virus par isolement en culture de
cellules
Le virus de rubéole peut se propager dans des cultures
de tissu mais ne donne pas un effet cytopathique (ECP).
Toutefois dans la culture du virus de la rubéole
certains cellules produisent une cytopathologie suffisante détectable
par les observateurs expérimentés (Jawetz et al.,
1973).
On cite ci-dessous quelques lignées cellulaires
animales pour la culture de virus de la rubéole:
· BHK 21: de Stoker et Macpherson. C'est une
lignée cellulaire qui provient des reins de bébé hamster,
cette lignée a subi plusieurs transformations et a été
clonée plusieurs fois. Certains clones ont donne un ECP alors que
d'autre permettent d'obtenir un titre élève
d'hémagglutinine.
· RK13: c'est une lignée de reins de lapin.
· SIRC: lignée issu de cornée de lapin
établie par Leerhoy du sérum Institut de Copenhague.
· VERO: lignée cellulaire provenant de rein de
singe cercopithèque.
Dans la pratique on utilise surtout:
· RK13 et SIRC pour l'isolement du virus, ces
lignées donnent un ECP total et rapide.
· BHK21 et d'autre lignée comme PS-Y155
(lignée cellulaire de rein de porc) ou
lignée de reins de singes BSC1 pour la
préparation et le titrage de
l'hémagglutinine.
La culture in vitro a permis de comprendre plusieurs
phénomènes sur la pathogénicité de la
rubéole (Maurin, 1984).
VIII.1.2. Détection du génome viral
La détection du génome viral est
réalisée soit par hybridation moléculaire directe ou par
la méthode d'amplification génique (méthode de PCR:
Polymerase Chain Reaction).
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C'est en 1986 que Terry et al ont rapporté le premier
essai de diagnostic anténatal de l'infection rubéolique par
hybridation moléculaire.
? L'hybridation moléculaire directe repose sur
l'utilisation de sonde localisée dans la région 3' du gène
E1. Cette hybridation permet de détecter 1 à 2 pico-gramme
d'ARN.
? D'autres auteurs ont mis au point la méthode
d'amplification génique en utilisant des amorces dans le gène
E1.
Toutes ces techniques nécessitent la validité sur
un grand nombre de prélèvements.
? La recherche d'ARN viral par PCR nichée (Nested PCR)
semble avoir une excellente sensibilité (détection d'une a deux
copies d'ARN). Elle se fait a partir de la de villosité choriale, du
placenta ou du produit d'avortement (Denis, 1999).
? La méthode Reverse Transcriptase PCR (RT-PCR) a
été développée et évalué pour la
détection de l'ARN du virus de la rubéole directement
prélevé à partir d'échantillons cliniques en
utilisant des amorces qui ont amplifié 592 nucléotides, d'une
région variable dans le gène E1.
La sensibilité de la PCR a été jugée
équivalente à celle des essais déjà publiés,
qui amplifient les petites régions du gène E1 (Cooray et
al., 2006).
Figure 10: Technique de détection de
l'infection rubéolique a partir du liquide amniotique
de foetus par PCR et électrophorèse
RT-PCR(A),Nested PCR(B) (Bienvenu et al.,2004)
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