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Clonage et expression de la protéine CFP10 de Mycobactérium Tuberculosis dans Pichia Pastoris

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par Bilel Masmoudi
INSAT - Ingénieur 2006
  

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VI.2) Pouvoir pathogène de M. tuberculosis :

Contrairement aux autres bactéries pathogènes, M. tuberculosis ne possède pas de facteur de virulence classique, de type toxine. Chez l'homme, M. tuberculosis utilise l'appareil respiratoire comme principale voie d'entrée. Il résiste à la dégradation par les macrophages alvéolaires, dans lesquels il est capable de se multiplier. Un des éléments cruciaux pour la survie de M. tuberculosis dans les phagosomes des macrophages est sa capacité à en diminuer l'acidification, ce qui a pour conséquence de bloquer ou de retarder la fusion du phagosome avec le lysosome. Au niveau moléculaire, ce phénomène n'est pas clairement élucidé, la détermination des mécanismes impliqués constitue un des enjeux majeurs de la recherche dans ce domaine. La réponse immunitaire de l'hôte contrôle la sévérité de l'infection par M. tuberculosis. Cette réponse immunitaire met en jeu la voie Th1, qui recrute des cellules dendritiques, des macrophages et des lymphocytes de type CD4 et CD8. Les bases moléculaires de la pathogénicité sont donc multifactorielles, impliquant à la fois la bactérie et l'hôte. (3).

VI.3) Diagnostic bactériologique :

Le diagnostic de certitude de la tuberculose repose sur la mise en évidence de Mycobacterium tuberculosis dans les prélèvements pathologiques : crachats et tubages gastriques pour la tuberculose pulmonaire ; urines, liquides de ponction des séreuses, etc... pour les autres localisations tuberculeuses. (10).

L'examen microscopique des frottis colorés par la méthode de ZIEHL-NEELSEN permet de mettre en évidence des bacilles acido-alcoolo-résistants. Lorsqu'il est positif il permet un diagnostic de forte présomption de tuberculose. (10).

Seul la culture permet un diagnostic de certitude de la tuberculose. M.tuberculosis ne pousse pas sur les milieux usuels. Il nécessite des milieux très enrichis. Le plus employé est un milieu à l'oeuf, le milieu de LOEWENSTEIN-JENSEN. Sur ce milieu il donne des colonies de teinte crème beige, sèches, à surface rugueuse, en chou-fleur, tout à fait caractéristiques. Fait important, les colonies n'apparaissent qu'en 21 jours en moyenne (temps de division de M.tuberculosis = 20 heures).

Or le délai long entre le début de l'exploration et le traitement augmente la morbidité et la mortalité par la maladie pour cela et depuis très longtemps, les chercheurs tentent d'utiliser la sérologie pour un diagnostic rapide. (3).

VI.4) Séquençage de génome de la souche H37Rv :

M. tuberculosis H37Rv a été la première souche pathogène isolée en 1905, c'est la souche de référence et la plus largement utilisée dans les recherches dans le domaine de la tuberculose.

En 1998, le séquençage total du génome de la souche H37Rv a constitué un tournant

dans l'histoire des bacilles tuberculeux ouvrant ainsi plusieurs voies de recherches. Ainsi, l'identification de nouveaux gènes à potentiel vaccinal, diagnostic et thérapeutique est rendue, de loin, plus facile par la génomique, la transcriptomique et la protéomique.

Le génome de M. tuberculosis H37Rv comprend 4.411.529 paires de bases et 3924 cadres de lecture ouverts ont été identifiés. L'analyse des banques de données a permis d'attribuer à 40% de ces séquences codantes une fonction prédite. (6).

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"Ceux qui rêvent de jour ont conscience de bien des choses qui échappent à ceux qui rêvent de nuit"   Edgar Allan Poe