V.6) Les facteurs agissant sur la cinétique de
production :
Chez Pichia pastoris, la phase
de production est découplée à la phase de croissance, ce
qui représente un avantage considérable, du fait qu'on peut
suivre la production de la protéine recombinante par le suivi de la
consommation du substrat inducteur : le méthanol.
En effet, pendant la phase de croissance le substrat
utilisé est le glycérol. Ce substrat exerce une répression
sur le promoteur AOX1 qui régule l'expression du gène
d'intérêt. Une fois le glycérol est épuisé du
milieu, la répression est levée et la phase de production peut
être initiée par l'utilisation du méthanol, substrat qui
induit l'expression des gènes sous le contrôle du promoteur AOX1
et donc la production de la protéine d'intérêt. Ainsi, la
concentration du méthanol représente un des facteurs les plus
influents sur le taux de production. (11).
VI) La tuberculose :
La tuberculose est une infection
bactérienne, qui reste l'une des plus grands fléaux qui touche
l'homme avec plus de dix millions de nouveaux cas et trois millions de
décès chaque année. (13). Elle est commune à
l'homme et à de nombreuses autres espèces animales. Elle est due
essentiellement aux bactéries appartenant au complexe
Mycobactérium tuberculosis et à diverses espèces
bactériennes appartenant au genre mycobactérium.
Le tiers de la population humaine est infecté par
M. tuberculosis, pathogène intracellulaire facultatif, mais
seulement 5 à 10% de cette population risquent de développer la
maladie. (21). Cette situation devient de plus en plus alarmante avec
l'émergence de souches multirésistantes et le SIDA. (14).
De 1908 à 1920 Calmette et Guérin
élaborent un vaccin qui porte leur nom : Bacille Calmette
Guérin (BCG). Il est employé pour la première fois
en 1921 et marque une étape importante dans la prophylaxie de la
maladie. La vaccination avec le BCG reste le moyen le plus efficace
jusqu'à nos jours mais cette efficacité et de plus en plus mise
en cause (1). Le taux de protection de ce vaccin varie, en fait de 0 à
80%. (3).
Cette situation de plus en plus alarmante, rend urgent
l'élaboration d'outils plus efficaces pour la lutte antituberculeuse,
à savoir, le développement des tests de diagnostic à haut
potentiel prédictif de la maladie, des nouveaux produits
thérapeutiques antituberculeux et de préférence, un vaccin
plus efficace que le BCG.
VI.1) Les bacilles de la tuberculose :
Les bactéries du genre Mycobacterium
sont des bacilles qui ne se colorent pas facilement mais qui, une fois
colorées, résistent à la décoloration par l'acide
et l'alcool et sont de ce fait dits bacilles «
acido-alcoolo-résistants ». Le genre comprend de nombreuses
espèces saprophytes ou commensales et des espèces
pathogènes dont les deux principales sont : Mycobacterium
tuberculosis, agent de la tuberculose, et Mycobacterium leprae,
agent de la lèpre.
M.tuberculosis est un bacille aérobie strict
immobile sans capsule et sans spore. Après coloration de ZIEHLNEELSEN
(fuchine phéniquée à chaud, décoloration par
acide-alcool, recoloration par le bleu de méthylène), il
apparaît comme un bacille rouge de 0,2 à 0,3 micron de large sur 3
à 5 microns de long, légèrement incurvé, à
extrêmités arrondies. (3).
Figure3 :
Mycobactérium tuberculosis
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