II.2.3.1 Evaluation de l'activité anti
radicalaire de 2,2-diphényl-1-picrylhydrazyle
(DPPH)
Plusieurs méthodes existent actuellement pour
l'évaluation de l'activité antioxydante in vitro mais
celle de la DPPH demeure la plus utilisée.
Préparation de l'extrait
L'extrait a été obtenu en mélangeant une
masse de 0,1g de la poudre de Detarium microcarpum dans 10 mL de
méthanol à 70 % et agité vigoureusement pendant deux
heures. Le mélange obtenu a été filtré sur le
papier wattman n°1 et le filtrat a été utilsé pour
l'évaluation de l'activité antioxydante in vitro selon
le protocole décrit par (Athamena et al.,2010).
? Principe
Dans ce test les antioxydants réduisent le DPPH de
couleur violette en un composé jaune, dont l'intensité de la
couleur est inversement proportionnelle à la capacité des antis
radicalaires présents dans le milieu à donner des protons (Figure
22) (Sanchez-Moreno, 2002).
Rédigé par BOBE MALLAYE 42
2018-2019
Propriétés biologiques de la pulpe du
fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)
Figure 22: Réaction d'un antioxydant avec
le radical DPPH
? Mode opératoire
0,5 mL de chaque solution méthanolique des extraits aux
différentes concentrations (0,025 ; 0,05 ; 0,1 ; 0,5, 1mg/mL) a
été ajouté à 2 mL de la solution du DPPH.
Parallèlement, un contrôle négatif est
préparé en mélangeant 0,5 mL de méthanol avec 2 mL
de la solution méthanolique de DPPH. La lecture de l'absorbance est
faite contre un blanc à 517 nm après 60 min d'incubation à
l'obscurité et à température ambiante. Le contrôle
positif est représenté par une solution d'un antioxydant
standard, l'acide ascorbique préparé dans les mêmes
conditions que les échantillons et pour chaque concentration, le test
est répété 3fois.
Expression des résultats
L'activité anti radicalaire est estimée selon
l'équation ci-dessous :
Inhibition (%) = [(Abs contrôle - Abs échantillon) /
Abs contrôle] x 100
Les valeurs de l'IC50 (Annexes 4) ont été
déterminées graphiquement par la régression
linéaire.
II.2.3.2 Pouvoir réducteur total
La capacité antioxydante de l'extrait de la poudre a
été évaluée en déterminant leur
habilité à réduire le fer (III) en fer (II) par la
méthode d'Oyaizu (1986).
? Mode opératoire
Dans un tube à essai, 1 mL de chaque extrait de la
pulpe du fruit de D. microcarpum a été
mélangé avec 2,5 mL d'un tampon phosphate (0,2 M,pH 6,6) et 2,5
mL de solution de l'hexacyanoferrate de potassium [K3Fe(CN) 6] à 1%. Le
tout a été incubé pendant 30 minutes à 50°C
dans un bain marie. Ensuite, 2,5mL d'acide trichloroacétique 10 % ont
été ajoutés et le mélange centrifugé
à 3000tours pendant 10 minutes à l'aide d'une centrifugeuse
(Firlabo). Puis 2,5 mL du surnageant ont été
prélevés et mélangés à 2,5 mL d'eau
distillée et 0,5 mL d'une solution aqueuse de FeCl3à 0,1%.
L'absorbance a été lue à 700 nm. Une courbe
d'étalonnage a
Rédigé par BOBE MALLAYE 43
2018-2019
Propriétés biologiques de la pulpe du
fruit de Detarium microcarpum (Guill. & Perr)
été tracée à partir de la droite
obtenue avec l'acide ascorbique utilisé comme référence
à différentes concentrations. Le pouvoir réducteur total a
été exprimé en équivalent d'acide ascorbique (mg
d'acide ascorbique/g de MS).
II.2.4 EVALUATION DE L'ACTIVITE BIOLOGIQUE
in vivo DE LA PULPE DU FRUIT DE Detarium
microcarpum
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