4.2.2. Caractérisation de la virulence
4.2.2.1. Génotypage des gènes
Pfmsp-1 et Pfmsp-2: Fréquences des familles alléliques
des gènes Pfmsp-1-2 en fonction du statut
clinique
Sur les 186 échantillons génotypés pour
les deux gènes d'interêt; 97,9% (182/186) et 96,2% (179/186)
d'amplicons ont été obtenus pour les gènes Pfmsp-1 et
Pfmsp-2, respectivement.
Les fréquences globales des familles alléliques
du gène Pfmsp-1 n'étaient pas significativement
différentes (80%, 146/182 ; 90%, 164/182 et 78%, 142/182, pour K1,
Mad20 et RO33 respectivement; p>0,05). Cependant, la famille
allélique RO33 s'est avérée plus fréquente dans les
isolats symptomatiques (93%; 120/129) comparés aux asymptomatiques
(38% ; 22/57), p=0,001. Par contre aucune différence
significative de fréquence pour les familles alléliques K1 et
Mad20 n'a été observée entre symptomatiques
(K1=82% ,107/129 ; Mad20=91%,118/129) et asymptomatiques (K1=68%,
39/57 ; Mad20=80% ,46/57) (p > 004 ; Tableau 3)
Pour ce qui est des familles alléliques du gène
Pfmsp-2, la fréquenc de 3D7 (91%, 163/179) était
significativement plus élevée que celle de F7 (55%, 99/179)
(p=0,002). Cependant, la fréquence de la famille
allélique n'était pas significativement différente en
fonction du statut clinique.. La famille allélique F7 quant à
elle n'a été observée que dans les isolats
asymptomatiques avec une fréquence de 78%. (Tableau 3).
Tableau 4:
Fréquences des familles alléliques des gènes Pfmsp 1 et
2
|
Pfmsp1
|
Familles alléliques
|
Global % (n/N)
|
p
|
Symptomatiques
|
Asymptomatiques
|
p*
|
|
K1 %
|
80 (146/182)
|
0,6
|
82 (107/129)
|
68 (39/57)
|
0,4
|
|
Mad20 %
|
90 (164/182)
|
91 (118/129)
|
80 (46/57)
|
0,6
|
|
RO33 %
|
78 (142/182)
|
93 (120/129)
|
38 (22/57)
|
0,001
|
|
Pfmsp2
|
3D7 %
|
91 (163/179)
|
0,002
|
88 (114/129)
|
85 (49/57)
|
0,9
|
|
F7 % (N/T)
|
55 (99/179)
|
0%
|
78 (45/57)
|
<0,05
|
n=effectif de chaque allèle,
N=nombre total d'isolats testés
4.2.2. Infections polyclonale des gènes
Pfmsp-1 et Pfmsp-2 en fonction du statut clinique
Des coinfections des familles alléliques K1, Mad20 et
RO33 du gène Pfmsp1ont été
détectées dans 87% (158/182) des cas. Dans l'ensemble, la triple
infection K1_Mad20_RO33 était la plus fréquente avec une
fréquence de 69% (109/158), P<0,05, Les doubles infections
RO33-Mad20, K1_Mad20 et K1_Ro33 avaient des fréquences
inférieures à 20%.
Dans l'ensemble, la proportion d'infection polyclonale
était significativement plus importante dans les isolats d'enfants
symptomatiques (121/158 soit 76%) comparés aux asymptomatiques (37/158
soit 24%), P<0,005. Par ailleurs, la proportion des combinaisons
K1_Mad20 était significativement plus importante dans les isolats
asymptomatiques comparés aux symptomatiques. Mais aucune
différence significative de fréquence des autres combinaison
alléliques (R033 et K1-RO33) n'a été mise en
évidence entre symptomatiques et asymptolatiques.
Figure 7: Infection
polyclonale du gène Pfmsp1
S'agissant du gène Pfmsp2, des combinaisons
des familles alléliques 3D7 et F7 ont été mis en
évidence dans 45% d'échantillons analysés (80/179). La
fréquence d'infections polyclonales n'était pas significativement
différente entre symptomatiques (52,5%) et asymptomatiques (47,5%) pour
cette combinaison allélique , p=0,7.
Figure 8 : Infection polyclonale du gène
msp2
4.3. Diversité allélique : polymorphisme
de longueur de taille de fragments
Les allèles identifiés ont été
classés selon leurs tailles. Un total de 31 allèles individuels
des deux gènes ont été identifiés chez l'ensemble
de sujets. Vingt trois (23) allèles différents du gène
Pfmsp-1 ont été observés (15 pour K1, 6 pour
Mad20, et 1 pour RO33) avec des tailles de fragments allant de 200, 210, 220,
240, 260, 280, 300, 320, 340, 380, 400, 460, 500, 580, à 600 paires de
bases. De plus 8 allèles du gène Pfmsp-2
différents, avec des tailles de fragments allant également de 200
,210, 300, 320, 380, 400, 500, à 600 paires de bases ont
été trouvés, dont 2 appartenant à la famille
allélique 3D7 et 6 appartenant à la famille allélique F7.
Le gène msp-2 (24%, 8/31) était moins polymorphe que
Pfmsp-1 (74%, 23/31), La famille allélique RO33 s'est
avérée monomorphe (avec une taille de fragment amplifiée
de 200 Pb) et représentait 4,4% (1/23) de tous les génotypes
Pfmsp-1. Les allèles de types K1 et Mad20 prédominaient
avec des fréquences de 65% (15/23) et 26% ( 6/23) respectivement,
P<0,05. Parmi les 23 allèles de K1, les allèles K1_200, et
K1_300 , étaient les plus fréquents avec de fréquences
respectives de 57% et 22% . Les autres allèles avaient des
fréquences inférieures à 10%. Pour les allèles de
type Mad20, Mad20_200 (52% ) et Mad20_300 ( 21%) étaient les plus
fréquents. Dans les familles alléliques du gène
Pfmsp-2, F7_200 (91,8%), 3D7_200 (97,5%) étaient les plus
fréquemment rencontrés. La fréquence des autres
allèles était inférieure à 10%.
Figure 8: Diversité
allélique, polymorphisme de longueur de taille de fragments dans
l'ensemble de la population
Figure 9. Diversité allélique,
polymorphisme de longueur de taille de fragments dans l'ensemble de la
population
Les différents profils alléliques variaient en
fonction de la symptomatologie clinique. Pour le gène Pfmsp-2,
5 allèles différents ont été repéré
dans les isolats d'enfants asymptomatiques ( 2 de type 3D7 et 3 de type F7) et
3 allèles ont été mis en évidence dans les isolats
symptomatiques (1 de type F7 et 2 de type 3D7). Deux (2) allèles de
type F7 (F7_ 400 et F7_480) ont uniquement été observés
dans les isolat d'enfants asymptomatiques bien qu'ayant des fréquences
inférieures à 20%. Cependant, pour les allèles
identifiés à la fois dans les isolats symptomatiques et
asymptomatiques, la fréquence de l'allèle F7_200 était
significativement plus élevée dans les isolats symptotamiques
comparés aux asymptomatiques P<0,05. Aucune différence
significative de fréquences entre les deux statut pour les autres
allèles n'a été observée, P>0,05.
En ce qui concerne le gène Pfmsp-1, 7
allèles différents ont été mis en évidence
dans les isolats asymptomatiques ( 4 de type Mad20 et 3 de type K1) et 22
allèles différents ont été observés dans les
isolats symptomatiques (K1=15, Mad20=7). Les allèles Mad20_400,
Mad20_280, Mad20_260, K1_210, K1_ 220, K1_ 260, K1_ 280, K1_320, K1_ 340, K1_
380, K1_ 400, K1_460, K1_ 500, K1_ 580, K1_600 ont été
uniquement observés dans les isolats symptomatiques. Certains
allèles étaient communs aux deux groupes sans aucune
différence significative de fréquence, P>0,05. (Figure 15)
|
|
