II.1.1.2. Structure protéique:
La transposase active des MLEs est un polypeptide de
350aa organisé en deux domaines (In Toumi, 2001-2002; In Halaimia Toumi,
2006), un domaine N terminal responsable de la liaison de la protéine
aux ITRs et un domaine C terminal doué d'une activité catalytique
permettant la transposition (In Augé Gouillou, 2003). Ce domaine est
caractérisé par la présence d'une triade catalytique
D,D(34)D dont le premier et le second acide aspartique (D) est localisé
à proximité des positions 158 et 250 respectivement et le dernier
est séparé du second par 34 acides aminé (In Toumi,
2001-2002).
Ces deux domaines comprennent des motifs qui semblent
indispensables à la transposition:
II.1.1.2.1. Les motifs caractéristiques du domaine
N-Terminal:
1. Un motif hélice-tour-hélice HTH (pour
Helix-Turn-Helix)
localisé dans la région bordée par les acides aminé
87 et 109 de la transposase, il est de type CRO ; Cro est une
protéine qui ne se fixe à l'ADN que sous une forme
dimérique dont chaque monomère est constitué de 03
hélices á et porte 66 acides aminés.
2. Huit motifs hélicesá (á1 à
á8) dont l'hélice á1 est responsable de l'accumulation de
la transposase sur l'ITR3' et l'hélice á2 participe à la
liaison de la transposase à l'ADN mais en s'associant avec le HTH.
3. Un feuillet â démontré qu'elle joue un
rôle dans la dimérisation des transposases (In Halaimia Toumi,
2006).
4. Des signaux d'adressage nucléaire appelé NLS
(Nuclear Localisation
Signal) permettant l'internalisation de la transposase dans le
noyau après sa synthèse dans le cytoplasme cellulaire. En effet
la localisation des NLS des TLEs a été identifiée
expérimentalement tandis que celle des MLEs reste
hypothétique et est basée sur des homologies de séquence
(In Augé Gouillou, 2003).
5. Un motif WVPHEL relativement conservé et
paraît impliquer dans un phénomène de
trans-dimérisation des molécules de la transposases (In
Augé Gouillou, 2003).
II.1.1.2.2. Les motifs caractéristiques du domaine
C-Terminal:
Outre que la triade catalytique D,D(34)D, ce domaine comporte
un motif YSPDLAPD très conservé dont le dernier D de ce motif
correspond au dernier D de la triade catalytique (figure 6.3) (In Halaimia
Toumi, 2006).
La transposase est une phosphoryletransférase dont
activité catalytique (de la triade D,D(34)D) requiert des cations
divalents qui est le magnésium, les trois résidus acides sont
associés dans une poche catalytique capable de contenir le ou les
cations, la présence du magnésium apporte des charges positives
permettant le recrutement des groupes nucléophiles impliqués
à chaque coupure de brin d'ADN. Le motif DDD est une signature qui
spécifie les éléments mariner tandis que les
TLEs sont spécifiés par une triade DDE (E pour le
glutamate) (In Augé Gouillou, 2003).
WVPHEL YSPDLAPD
â1 á1 á2 á3 HTH
á4 á5 á6
NLS NLS
D D 34 D
Domaine N-terminal Domaine C-terminal
â1: Feuillet Beta
á1 à á8 : Hélices
alpha
NLS : Signal potentiel de Localisation
Nucléaire
Figure 6.3 : Structure générale
de la transposase des MLEs (ici la transposase de
Mos1)
(modèle d'après Halaimia Toumi, 2006)
II.1.2. Une comparaison entre les MLEs et les
TLEs:
Selon les structures nucléiques, ils se diffèrent
dans (voir tableau 2) :
Tableau 2 : Les différences
nucléiques entre les MLEs et les TLEs
|
Taille de
|
MLEs
|
|
|
|
TLEs
|
|
ORF
|
1050
|
|
|
|
1050#177;90
|
|
ITR
|
19-69 Mcmar1
|
à
|
l'exception
|
de
|
24-756
|
|
UTR
|
|
|
|
|
150-1300 en 5' 100-2200en 3'
|
|
Taille totale
|
1300
|
|
|
|
1500-4700
|
Selon leurs structures protéiques, ils se distinguent
dans: (voir tableau 3)
Tableau 3: les différences
protéiques entre les MLEs et les TLEs
|
Domaine D Terminal
|
MLEs
|
TLEs
|
|
HTH
|
Un seul motif
|
Deux motifs
|
|
Les hélices á
|
Huit hélices á
|
Deux hélices dont chacune est associée à un
HTH
|
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Les motifs conservés
|
WVPHEL
|
WVPHEL
|
Dans le domine C terminal les deux éléments se
diffèrent dans la triade catalytique qui est D.D(34)E chez les
TLEs (Figure 6.4)
1 7 45 68 108 153 244 279 340
á1, á2: Hélices Alpha
HTH : Hélice tour Hélice
NLS : Signal de localisation
nucléaire.
Figure 6.4 : Structure de la transposase des
TLEs (ici la transposase de Sleeping
Beauty) (In Halaimia
Toumi, 2006)
(á1 + HTH) (HTH + á2) NLS D
D34E
Domaine N-terminal Domaine C-terminal
YSPDLAPE
| 
