II.9- Piégeage du peroxyde d'hydrogène (H2O2
scavenging activity)
Le peroxyde d'hydrogène est un dérivé
non-radicalaire d'oxygène et considéré comme toxique pour
les cellules car il permet la formation des radicaux hydroxyles à
l'intérieur de la cellule (SHRINIVAS et al., 2011).
II.9.1- Principe
Une des méthodes les plus communes pour évaluer
la capacité du piégeage du peroxyde d'hydrogène est
basée sur l'absorption de cette molécule dans le domaine de
l'UV.
Comme la concentration de H2O diminue par les composés
piégeurs, la valeur d'absorbance de ce dernier à 230nm diminue
également. Néanmoins il est tout à fait normal que les
échantillons absorbent également à cette longueur d'onde,
exigeant ainsi l'exécution d'une mesure blanc (MALGALHAES et al.,
2008).
II.9.2- Dosage
Le piégeage du peroxyde d'hydrogène (H2O2) peut
être déterminé par la méthode décrite par
RUCH et al. (1989). Une solution de H2O2 (10 mM) a
été préparée dans un tampon phosphate (pH 7,4). Le
mélange réactionnel est composé de 10 mM de
H2O2 et de différentes concentrations d'échantillons.
Les valeurs d'absorbance ont été mesurées à 0 min
et après 60 min à 240nm. L'acide ascorbique a été
utilisé comme standard (BUMRELA et NAIK, 2011).
Le pourcentage de piégeage de H2O2 de
l'extrait a été calculé d'après la formule suivante
:
L'activité de piégeage des radicaux libres
H2O2 (%) = [{Ao - A1/ Ao}] X 100.
Ao : l'absorption de H2O2.
A1 : l'absorbance de H2O2 en présence de
l'extrait (GHAISAS et al., 2008).
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Chapitre II- Méthode d'étude d'activité des
antioxydants des plantes médicinales
II.10- Méthode de la xanthine oxydase
II.10.1- Principe
Cette méthode est basée sur l'inhibition de XO
(xanthine oxydase) qui conduit une diminution de la production d'acide urique,
qui a été déterminée par spectrophotométrie.
Tous les extraits ont inhibé les activités XO d'une
manière dépendante de la dose ( OSKOUEIAN et al.,
2011).
II.10.2- Dosage
L'extrait (500 uL de 0,1 mg/ml) et allopurinol (100u g/ml)
(dans le méthanol) sont mélangés avec 1,3 ml du tampon
phosphate (0,05 M, pH 7,5) et 0,2 ml de 0,2 unités/ ml de solution de
xanthine oxydase. Après 10 min d'incubation à la
température ambiante (25 C°), 1,5 ml de substrat de la
solution de xanthine de 0,15 M est ajoutée à ce mélange.
Le mélange est à nouveau incubé pendant 30 min à
température ambiante (25 C°), puis l'absorbance est
mesurée
à 293 nm en utilisant un spectrophotomètre
contre le blanc (0,5 ml de méthanol, de 1,3 ml du tampon phosphate et
0,2 ml de la xanthine oxydase). La solution de mélange de 0,5 ml de
méthanol, 1,3 ml du tampon phosphate, de 0,2 ml de la xanthine oxydase
et 1, 5 ml du substrat de xanthine est utilisé comme témoins (NUR
ALAM et al., 2012).
Le pourcentage d'inhibition est calculé selon la
formule suivante :
Pourcentage d'inhibition = 1- (As/Ac) 100
As : Absorbance de l'échantillon d'essai.
Ac : Absorbance de l'échantillon de contrôle (NUR
ALAM et al., 2012).
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Chapitre II- Méthode d'étude d'activité des
antioxydants des plantes médicinales
II.11- Chélation du fer
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