II.11.1- Principe
La capacité chélatrice des extraits des plantes
est déterminée selon la méthode de LE et ses
collaborateurs (2006). La méthode est basée sur l'inhibition de
la formation du complexe Fe(II)-Ferrosine après le traitement des
échantillons avec les ions Fe2+ (BENBRINIS, 2012).
II.11.2- Dosage
500 ul des solutions d'extraits ou du chélateur
standard (EDTA) à différentes concentrations sont
additionnées à 100 ul de chlorure de fer (FeCl) (0.6 mM) et 900
ul de méthanol. Après 5 min d'incubation, cent microlitres de
ferrosine (5 mM) sont ajoutés, et le mélange est agité et
laissé réagir pendant 10 min pour permettre la
compléxation du fer résiduel. L'absorbance du complexe
Fe2+-ferrosine est mesurée à 562 nm (BENBRINIS,
2012).
L'activité chélatrice est exprimée en
pourcentage en utilisant l'équation ci-dessous:
Activité chélatrice (%) = [(Ac- At)/ Ac] x100
Ac : absorbance du standard.
At : absorbance de l'échantillon (BENBRINIS, 2012).
II.12- Méthode de DEPG
(N,N-dimethyl-p-phenylene
diaminedihydrochloride) II.12.1- Principe
Cette méthode est basé sur la réduction
de couleur de la solution tamponnée de DEPG dans un tampon
acétate et le chlorure ferrique. La procédure implique la mesure
de la diminution de l'absorbance de DEPG en présence d'accepteurs avec
maximum d'absorption de 505 nm. L'activité a été
exprimée en pourcentage de réduction de DEPG (NUR ALAM et
al., 2012).
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Chapitre II- Méthode d'étude d'activité des
antioxydants des plantes médicinales
II.12.2- Dosage
Le dosage peut être effectué selon la
méthode de FOGLIANO et al. (1999) par un mélange de 1 ml
de solution de DEPG (200 mM), de 0,4 ml de chlorure ferrique (III) (0,05 M), et
de 100 ml d'une solution tampon d'acétate de sodium à 0,1 M, en
modifiant le pH à 5,25. Le mélange à être maintenu
dans l'obscurité, sous réfrigération, et à une
température basse (4-5 C°). La
réaction a lieu lorsque 50 uL de l'échantillon (une dilution de
1:10 dans de l'eau) est ajouté à 950 uL de solution de
DMPD.+. L'absorbance est mesurée après 10 min
d'agitation continue, qui est le temps pris pour atteindre constante les
valeurs de décoloration. Les résultats sont quantifiés en
mm Tolox sur la courbe d'étalonnage correspondante (NUR ALAM et al.,
2012).
II.13- Test qualitatif au â-carotène
II.13.1- Principe
Ce test permet de mettre en évidence le pouvoir
antioxydant des extraits. En effet, l'acide linoléique oxydé en
radical peroxyle agit sur le f3-carotène de couleur orange qui devient
incolore. La présence d'antioxydant dans l'extrait de plante par exemple
inhibe cette décoloration dans le milieu gélosé (GRAVEN et
al., 1992).
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