II.6- Méthode de thiocyanate ferrique (FTC)
II.6.1- Principe
L'activité antioxydant des extraits de plantes est
mesurée par l'inhibition de la peroxydation de l'acide linoléique
en utilisant la méthode au thiocyanate ferrique selon la méthode
décrite par TAKAO et al. (1994)(BIDIE et al.,
2011).
II.6.2- Dosage
Le mélange réactionnel contenant 0,4 ml
d'extraits (100 ìg/ml), 0,4 ml d'acide linoléique (2,52 % dans
l'éthanol absolu) et 0,8 ml de tampon phosphate (pH 7,4) est
incubé dans un bain-marie pendant 1 heure à 40 Co. Un
aliquote (0,1 ml) de cette solution est alors ajouté au mélange
constitué de 5 ml d'éthanol 70 % et 0,1 ml de thiocyanate
ammonium (30 %). Après 3 minutes, 0,1 ml de FeCl2 (Chlorure de fer)
préparé dans 3,5 % de HCl (20 mM) est ajouté au milieu
réactionnel. Le blanc est réalisé en remplaçant les
extraits par de l'eau distillée l'absorbance du mélange obtenu
(couleur rouge) est mesurée à 500 nm toutes les 24 h
jusqu'à ce que l'absorbance du témoin atteint son maximum.
L'antioxydant standard (concentration finale de 0,02 % p/v) est
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Chapitre II- Méthode d'étude d'activité des
antioxydants des plantes médicinales
utilisé comme contrôle positif, et le
mélange sans l'échantillon est utilisé comme
contrôle négatif (NUR ALAM et al., 2012).
Le pourcentage d'inhibition de la peroxydation lipidique est
alors calculé selon l'équation suivante:
Inhibition (%) = (1- (DO essai/ DO blanc)) x 100
DO blanc : densité optique du blanc.
DO essai : densité optique d'échantillon (BIDIE et
al., 2011).
II.7- Piégeage du radical superoxyde (O2·-)
II.7.1- Principe
Cet essai évalue la capacité d'un produit
à capter un radical libre, l'anion superoxyde O2
·. Ce radical est généré in vitro
par le système hypoxanthine/xanthine oxydase.
Dans cette méthode, le radical réduit le
NBT2+ (Nitro-Blue Tétrazolium) de couleur jaune, en bleu de
formazan de couleur pourpre qui absorbe à 560 nm. Ainsi un
composé antioxydant capable de capter l'anion superoxyde empêchera
la formation du bleu de formazan et la solution restera jaune. Les absorbances
obtenues permettent de calculer un pourcentage d'inhibition de la
réduction du NBT2+ par rapport à un témoin
constitué du milieu réactionnel dépourvu de composé
antioxydant. On peut ensuite tracer une courbe représentant le
logarithme du pourcentage d'inhibition en fonction de la concentration de
composé testé, et déterminer la CI50 (concentration
inhibant 50% de l'activité) du composé (PAREJO et al.,
2002).
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