II.3.2- Dosage
120 uL de l'échantillon dilué est ajouté
à 2,4 ml du tampon phosphate (pH 7,4), 375 uL d'eau distillée, 30
uL de R-PE dilué et 75 uL de ABAP; la cinétique de
réaction à 38 Co est enregistrée pendant 45 min
par un spectromètre de luminescence. Les valeurs de TRAP sont
calculée à partir de la longueur de la phase de latence due
à l'échantillon par rapport à la norme (NUR ALAM et
al., 2013).
II.4- Réduction du radical- cation ABTS ou
détermination du TEAC
II.4.1- Principe
La méthode de radicale ABTS est l'un des tests les plus
utilisés pour la détermination de la concentration des radicaux
libres. Il est basé sur la neutralisation d'un radical - cation
résultant de la mono électronique oxydation du chromophore
synthétique 2,2'- azino-bis (3 - éthylbenzothiazoline -6-
sulfonique acide) (ABTS
·) :
ABTS
· ABTS
·+ +
e- .
Cette réaction est suivie par spectrophotométrie
par la variation de spectre d'absorption (JIRI et al., 2010).
20
Chapitre II- Méthode d'étude d'activité des
antioxydants des plantes médicinales
II.4.2- Dosage
Le radical cation ABTS est généré en
mélangeant à volume égal une solution de 3 mM de
persulfate de potassium K2S2O8 et une solution stock d'ABTS à
8 mM, le tout est conservé à l'abri de la lumière et
à la température ambiante durant 16 h avant utilisation (AWIKA et
al., 2004). La solution obtenue est diluée avec du tampon
phosphate (0,2 M, pH 7,4) contenant 150 mM de NaCl pour obtenir une absorbance
de 1,5 à 734 nm. 2,9 ml de cette solution fraichement
préparée sont ajoutés à 0,1 ml d'extrait et la
lecture est faite à 734 nm après 30 min pour chaque série
d'analyses. Le Trolox est utilisé comme standard et le résultat
final est exprimé en micromoles d'équivalent Trolox par gramme de
matière sèche (BA et al., 2010).
Le pourcentage d'inhibition est calculé selon la
formule suivante :
Pourcentage inhibition (%) = [(Abs témoin - Abs blanc)]
/ (Abs témoin)] x 100
Abs témoin : l'absorbance du radical ABTS+
méthanol.
Abs blanc : l'absorbance de l'échantillon ABTS radical +
Extrait / standard (ADEOLU A et al.,
2008).
II.5- Test de blanchissement du f- carotène
II.5.1- Principe
Dans ce test l'activité antiradicalaire des extraits
est déterminée en mesurant l'inhibition de la dégradation
oxydatif du f3-carotène (décoloration) par les produits
d'oxydation de l'acide linoléique selon la méthode décrite
par KARTAL et al (2007) (KOUAMÉ et al., 2009).
II.5.2- Dosage
Brièvement 2 mg de f3 - carotène ont
été dissous dans 1 ml de chloroforme. La solution obtenue a
été introduite dans un ballon contenant 2 mg d'acide
linoléique et 200 mg de Tween 40. Après évaporation du
chloroforme, 100 ml d'eau distillée saturée en oxygène ont
été ajoutés
21
Chapitre II- Méthode d'étude d'activité des
antioxydants des plantes médicinales
avec agitation vigoureuse. 2.5 ml de la solution obtenu est
mélangée avec 350ìl de chaque extrait (2g/l) et du
témoin BHT. L'absorbance a été immédiatement
mesurée pour le BHT à 490 nm. Les autres lectures sont
mesurées à différents intervalles de temps (2h, 4h, 6h,
12h, et48h) (TEPE et al., 2006).
L'activité anti-oxydante relative après 48 heures
est calculée selon la relation suivante :
AAR = (Abs Échantillon/ Abs BHT) x 100
AAR : activité anti-oxydante relative.
Abs Échantillon : absorbance de l'échantillon
après 48 heures.
Abs BHT : absorbance du BHT après 48 heures (ATHAMENA et
al., 2010).
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