1-8-Action des agents chimiques
Les ions métalliques K+ et Na+
ont exercé un léger effet activateur sur la
âglucosidase, tandis que les agents chimiques
Cu2+, Zn2+, Fe3+, DTNB (5,5-dithio-bis(2-
nitrobenzoate)), pCMB (para-chloromercuribenzoate), EDTA et
SDS ont inhibé son activité. Les ions divalents Ba2+,
Mg2+, Sr2+, Ca2+ n'ont eu aucun effet sur la
même activité enzymatique (Tableau 21).
Tableau 21 : Effet de quelques agents chimiques sur la
â-glucosidase du suc digestif de la larve de Rhynchophorus palmarum
(Curculionidae)
|
Agent chimique
|
Concentration
(% ou mM)
|
Activité relative
(%)
|
|
Témoin
|
1
|
100
|
|
Ba2+
|
1
|
100
|
|
Mg2+
|
1
|
100
|
|
Mn2+
|
1
|
100
|
|
Sr2+
|
1
|
100
|
|
Ca2+
|
1
|
100
|
|
Ions
|
Cu2+
|
1
|
13
|
|
Zn2+
|
1
|
67
|
|
Na+
|
1
|
110
|
|
K+
|
1
|
119
|
|
EDTA
|
1
|
82
|
|
Fe3+
|
1
|
71
|
|
Tris
|
1
|
100
|
|
â-mercapto-éthanol
|
0,1
|
86
|
|
pCMB
|
0,1
|
56
|
|
Réducteurs
|
|
|
|
|
DTNB
|
0,1
|
8
|
|
L-cystéine
|
0,1
|
95
|
|
Triton X-100
|
0,1
|
100
|
|
Tween 80
|
0,1
|
100
|
|
Détergents
|
SDS
|
0,1
|
58
|
|
Urée
|
0,1
|
94
|
|
Guanidine
|
0,1
|
100
|
1-9-Réactions de transglucosylation
catalysées par la â-glucosidase 1-9-1-Influence du pH sur
l'activité de transglucosylation
Lorsque le cellobiose et le 2-phényléthanol ont
été utilisés respectivement comme donneur et accepteur de
glucosyle dans la réaction de transglucosylation catalysée par la
âglucosidase, le pH optimum a été de 6,6
(Fig. 36).
1-9-2-Influence du temps d'incubation sur
l'activité de transglucosylation
Le pourcentage maximum de synthèse du
phényléthylglucoside a été obtenu en 16 h de
réaction. Cette valeur a été de 20 %. Après 16 h de
réaction, le pourcentage de transglucosylation a considérablement
diminué pour atteindre 8 % (Fig. 37) en 36 h de
réaction.
1-9-3-Influence de la concentration de l'accepteur
Le meilleur pourcentage de transglucosylation a
été obtenu pour une concentration d'accepteur de glucosyle
(2-phényléthanol) de 100 mM lorsque la concentration du donneur
de glucosyle (cellobiose) a été de 400 mM. Entre 0 et 50 mM, les
pourcentages de transglucosylation ont été très faibles et
n'ont pas dépassé 7 % (Fig. 38).
1-9-4-Influence de la concentration du donneur
Le meilleur pourcentage de transglucosylation a
été obtenu avec une concentration de donneur de glucosyle de 400
mM. Au-delà de cette concentration, ce pourcentage a
considérablement diminué pour atteindre 1 % à 800 mM
(Fig. 39).
Le Tableau XXII récapitule les donnés relatif
à la détermination des conditions optimales de
transglycosylation.
Transglucosylation (%)
25
20
15
10
0
5
3 4 5 6 7 8 9
pH
Figure 36 : Influence du pH sur la réaction de
transglucosylation catalysée par la âglucosidase du suc digestif
de la larve de Rhynchophorus palmarum (Curculionidae) Donneur
de glucosyle : cellobiose 400 mM. Accepteur de glucosyle:
2-phényléthanol 100 mM. Tampon acétate 100 mM (pH 3,6-5,6)
phosphate 100 mM (pH 5,6-8). Enzyme 12 UE. Temps d'incubation : 16 h.
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40
Transglucosylation (%)
25
20
15
10
0
5
Temps d'incubation (h)
Figure 37 : Influence du temps d'incubation sur la
réaction de transglucosylation catalysée par la
â-glucosidase du suc digestif de la larve de Rhynchophorus palmarum
(Curculionidae)
Donneur de glucosyle : cellobiose 400 mM. Accepteur de glucosyle:
2-phényléthanol 100 mM. Tampon phosphate 100 mM pH 6,6. Enzyme 12
UE. Temps d'incubation : 16 h.
Tansglucosylation (%)
25
20
15
10
0
5
0 100 200 300 400 500 600 700
2-Phényléthanol (mM)
Figure 38 : Influence de la concentration de
l'accepteur (2-phényléthanol) sur la réaction de
transglucosylation catalysée par la â-glucosidase du suc digestif
de la larve de Rhynchophorus palmarum (Curculionidae)
Donneurs de glucosyle : cellobiose 400 mM. Accepteur de
glucosyle: 2-phényléthanol (0 à 600 mM). Tampon phosphate
100 mM pH 6,6. Enzyme 12 UE. Temps d'incubation : 16 h.
Transg,lucosilation (%)
25
20
15
10
0
5
0 200 400 600 800 1000
Cellobiose (mM)
Figure 39 : Influence de la concentration du donneur
de glucosyle (cellobiose) sur la réaction de transglucosylation
catalysée par la â-glucosidase purifiée du suc digestif de
la larve de Rhynchophorus palmarum (Curculionidae)
Donneurs de glucosyle : cellobiose (0 à 800 mM). Accepteur
de glucosyle: 2-phényléthanol 100 mM. Tampon phosphate 100 mM pH
6,6. Enzyme 12 UE. Temps d'incubation : 16 h.
Tableau 22 : Récapitulatif des conditions
optimales des réactions de transglycosylation catalysées par la
â-glucosidase du suc digestif de la larve de Rhynchophorus palmarum
(Curculionidae) et le meilleur pourcentage de
transglucosylation.
Paramètre physicochimique Valeur
pH optimum de transglucosylation 6,6
Temps d'obtention du meilleur pourcentage de transglucosylation
(h) 16
Concentration du donneur pour l'obtention du meilleur 400
pourcentage de transglucosylation (mM)
Concentration de l'accepteur pour l'obtention du meilleur 100
pourcentage de transglucosylation (mM)
Meilleur pourcentage de transglucosylation (%)
20
131
| 
