Dosage de cotinine urinaire : interet pour l'evaluation du statut tabagique

II. MATERIEL ET METHODES

1. Matériel

1.1 Population d'étude

Notre population est formée auprès de sujets fumeurs (F) [n = 47] âgés de 17 à 73 ans, de fumeurs passifs (FP) [n = 50] âgés de 3 à 75 ans, et de non fumeurs non exposés (NF) [n = 50] formant le groupe témoin (Tableau I).

Afin de faciliter l'exploitation des données, différentes catégories de comportement ont été distinguées, c'est ainsi que dans la catégorie des fumeurs actifs figurent les sujets fumant moins de 10 cigarettes/j, ceux fumant entre 10 - 20 cigarettes et ceux consomment plus de 20 cigarettes/j. Les fumeurs passifs ont été classés en trois catégories en fonction du degré d'exposition et répartis en quatre groupes en fonction de l'ancienneté de l'exposition.

Tableau I: Population étudiée

	Fumeurs (F)	Fumeurs passifs (FP)	Non fumeurs (NF)	Total
Hommes	45	13	21	79
Femmes	2	37	29	68
Age moyen (années)	29,6 #177; 12,7	24,6 #177; 16,8	26, 9 #177; 19	147

1.2 Recueil des échantillons urinaires

Pour chaque sujet de l'étude, 10 mL d'urines ont été recueillis dans un flacon stérile sans conservateur. Chaque prélèvement a fait l'objet d'un étiquetage avant son acheminement au laboratoire.

Ces prélèvements ont été rapportés rapidement au laboratoire pour éviter toute détérioration et contamination extérieure et conservés à + 4°C.

1.3 Réactifs utilisés

Nous avons utilisé le kit de dosage de la cotinine urinaire (Thermo Electron corporation. Réf : 981632). Les réactifs sont prêts à l'emploi et ont été adaptés sur automate multiparamétrique de transfert Konelab^TM de Thermo Electron. La limite de détection du kit est de 33 ug/L.

Ø Réactif A : Réactif anticorps / substrat

o Anticorps monoclonal anti-cotinine (de souris)

o Glucose-6-phosphate

o NAD+

o Tampon Tris

o NaN3 < 0, 1%

Ø Réactif B : Réactif conjugué enzymatique

o G6PDH marquée à la cotinine

o Tampon Tris

o NaN3 < 0,1%

Ø Une trousse de Calibration set D, code 981633 ; cette trousse contient : six flacons aux concentrations respectives de D₀ = 0 ug/L, D₁ = 100 ug/L, D₂ = 250 ug/L, D3 = 500 ug/L, D₄ = 1000 ug/L et D₅ = 2000 ug/L.

1.4 Appareillage

Ø Automate multiparamétrique de transfert KonelabTM 30 de Thermo Electron Lab systems, Finlande.

Ø Centrifugeuse.

Ø Balance électronique.

Ø Réfrigérateur.

Ø Etuve.