2.5.2. Dosage des flavonoïdes
La méthode du trichlorure d'aluminium (Bahorun et al.
1996) est utilisée pour quantifier les flavonoïdes dans les
extraits de Cachrys libanotis . À 1 ml d'échantillon ou
standard (préparés dans le méthanol) est ajouté 1
ml de la solution d'AlCl3 (2% dans le méthanol). Après 10
minutes de réaction, l'absorbance est lue à 430
nm. La concentration des flavonoïdes est déduite à partir
d'une gamme d'étalonnage établie avec la quercétine (0-40
jtg/ml) et est exprimée en microgramme
d'équivalent de quercétine par milligramme d'extrait
(jtg EQ/mg d'extrait).
1,4
y = 0,0318x + 0,0193
R2 = 0,9962
y = 0,0164x + 0,0173
R2 = 0,9935
|
Absorbance
|
1,2
1 0,8 0,6 0,4 0,2
0
|
0 10 20 30 40
ug/ml
Figure10: courbe d'étalonnage de la
Quercetine () et Rutine(?).Chaque point des deux
courbes
représente la moyenne #177; SEM (n = 3)
2.5.3. Dosage des tanins
La capacité de précipiter l'hémoglobine a
été déterminé par l'hémoanalyse en utilisant
le sang frais bovin selon la méthode décrite par Bate smith
(1973). Brièvement, un volume de sang hémolysé (absorbance
=1.6) a été mélangé avec un volume d'extraits.
L'absorbance de surnageant (4000 rpm pendant 10 min à4°c) est
mesuré à 576 nm contre une solution blanc. La courbe
d'étalonnage est construite avec l'acide tannique (0-600ug/ml) et
l'efficacité de précipitation des solutions test est
exprimée par équivalent d'acide tannique.
0,9
0,8
0,7
absorbance
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
0 200 400 600 800
concentration ug/ml
Figure11: courbe d'étalonnage de
l'acide tannique. Chaque point de la courbe représente la
moyenne
#177; SEM (n = 3).
2.5.4. Inhibition de l'activité de la xanthine
oxydase par les extraits de Cachrys libanotis
L'effet inhibiteur des extraits de Cachrys libanotis
sur l'activité de la XO a été étudié
spectrophotométriquement en suivant la quantité de l'acide urique
produit par oxydation de 100 uM de xanthine dissous dans un tampon phosphate de
sodium saturé on air (Na2HPO4 / NaH2PO4, 50 mM, pH 7.4, contenant 0.1 mM
d'EDTA), en présence de plusieurs concentrations de chaque extrait de
Cachrys libanotis (préparées dans le tampon phosphate de
sodium ou dans le méthanol) (Robak and Gryglewski, 1988 ; Boumerfeg et
al., 2009). L'absorbance a été lue à 295 nm, et
l'activité inhibitrice de ces extraits a été
comparée par rapport au standard allopurinol qui est l'inhibiteur
spécifique de la XO. Après ajout de la XO, la réaction a
été suivie pendant 60 secondes et l'activité inhibitrice
des extraits de Cachrys libanotis a été exprimée en
pourcentage d'inhibition (I %) calculé ainsi:
I % = [(AC - AE) / AC] × 100
AC: absorbance en absence de l'inhibiteur (contrôle
négatif) AE: absorbance en présence de l'inhibiteur
la concentration de l'inhibiteur (Y = a X + b). Elle a
été exprimée en mg/ml et comparée avec celle de
l'allopurinol; IC50 = (50 - b) / a
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