II.3.2 Technique d'etude II : La cytogenetique moleculaire
:
11.3.2.1 Principe de la technique
Le principe repose sur l'utilisation d'une sonde
moléculaire, c'est-à-dire une petite séquence d'ADN (ou
d'ARN) dont l'emplacement normal est connu dans le génome et qui est
marquée chimiquement de façon à pouvoir être
repérée par la suite. Cette sonde est mise en contact avec les
chromosomes d'une mitose (ou de noyaux interphasiques) et va s'hybrider (se
fixer) spécifiquement au niveau de sa séquence
complémentaire. On peut alors visualiser la sonde au microscope dont
l'emplacement identifie précisément la région
chromosomique dont elle est complémentaire.
Les sondes sont marquées soit avec une molécule
fluorescente, soit avec une haptène (molécule qui peut être
reconnue par un anticorps). Dans le premier cas, la sonde est directement
visible au microscope à fluorescence, tandis que dans le second, une
étape supplémentaire de révélation avec un
anticorps fluorescent est nécessaire.
11.3.2.2 Diff~rents types de sondes sont utilisies
: 11.3.2.2.1 Sondes centromeriques :
Elles s'hybrident au niveau des centromères des
chromosomes. Les séquences dont elles sont complémentaires sont
naturellement présentes en un grand nombre d'exemplaires au niveau des
centromères ; le signal obtenu est donc en général intense
car la sonde s'hybride sur chacune des séquences complémentaires
présentes. Ces sondes sont surtout utiles pour dénombrer les
chromosomes, aussi bien en métaphase qu'en interphase et pour identifier
l'origine de chromosomes marqueurs.
11.3.2.2.2 Sondes de peinture chromosomique :
Elles sont constituées d'un ensemble de sondes de
petite taille qui couvrent l'ensemble du chromosome. Ces sondes sont obtenues
après isolement et marquage de l'ADN d'un chromosome ; leur
réalisation ne nécessite pas de connaître la
séquence de cet ADN. Après hybridation, on observe un marquage de
tout le chromosome. Il existe également des peintures spécifiques
d'un bras ou même de quelques bandes chromosomiques. Ces sondes sont
très utiles pour interpréter certaines translocations complexes,
mettre en évidence des échanges de petite taille, identifier
précisément l'origine d'un fragment non identifié.
11.3.2.2.3 Sondes locus specifique :
Comme leur nom l'indique, ces sondes de petite taille permettent
d'identifier une région très précise du génome.
Elles sont obtenues par marquage de l'ADN cloné dans
différents
egiagotertique et laid/ Caton deo
détutpatideo tiralipteo
vecteurs (plasmides, cosmides, YACS, BACs...). Leur
intérêt principal réside dans la mise en évidence
rapide de remaniements impliquant une région chromosomique
précise (microdélétions, translocations, inversions
...)
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