11.3 Visualisation des chromosomes
Il existe des colorants qui permettent de visualiser la
chromatine grâce à leur affinité pour
et/ou les protéines qui lui sont associées. Le
plus couramment utilise est le Giemsa qui est une association de trois
colorants de base et qui donne une coloration rose violacée de la
chromatine en lumière visible. (figure 13)
Il existe également des colorants fluorescents qui
permettent de visualiser spécifiquement l'ADN
car ils s'intercalent
entre les bases de la double hélice. C'est le cas de la moutarde de
quinacrine
(figure 13 du DAPI (4',6-diamino ou de
I'lodure de Propidium. (Figure 13)
Figure 13 : métaphase coloré aux
colorations visualiser du chromosome du gauche a droit Moutarde de quinacrine
et l'iodure de propidium.
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11.3.1 technique d'etude I : le caryotype ; Obtention de
preparation chromosomique:
Comme on l'a vu plus haut, les chromosomes ne sont visibles que
pendant une courte
période du cycle cellulaire, lors de la division
cellulaire (mitose ou méiose). Toutes les
techniques cytogénétiques visent donc à obtenir un maximum
de cellules bloquées à ce stade.
11.3.1.1 Culture cellulaire :
Pour cela, il est nécessaire d'avoir des cellules en
phase de multiplication active, soit spontanément (cas des
villosités choriales ou de certaines cellules tumorales) soit par une
culture préalable le plus souvent (fibroblastes, tout type cellulaire
capable de se diviser) parfois associée à une stimulation
(lymphocytes sanguins). La durée de cette culture est variable en
fonction du type cellulaire considéré et de la quantité de
matériel biologique disponible au départ.
11.3.1.2 Blocage des cellules en mitose :
L'étape suivante consiste à bloquer les cellules
en métaphase afin de pouvoir observer les chromosomes. Pour cela, on
utilise un poison du fuseau de division (classiquement c'est la Colchicine qui
est utilisée ou son équivalent synthétique la
Colcémide) qui empèche la progression de la mitose vers
l'anaphase
11.3.1.3 Choc hyp otonique :
Les cellules sont alors plongées dans une solution
hypotonique ce qui entraîne leur gonflement. Cette étape est
indispensable à l'obtention d'un étalement correct des
chromosomes.
11.3.1.4 Fixation & Etalement :
Enfin, la dernière étape consiste en une
fixation par un mélange d'alcool et d'acide acétique. La
préparation est alors étalée en laissant tomber une goutte
de la suspension cellulaire sur une lame.
Cas particulier : certains types cellulaires comme les
fibroblastes adhèrent au support lors de la culture. On peut obtenir des
métaphases à partir de ces cellules sans les détacher de
leur support, toutes les étapes précédentes étant
réalisées directement sur la surface de culture (sauf
l'étalement qui est bien sûr inutile dans ce cas).
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