Chapitre II Matériel et méthodes
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II. 2. Recherche de type respiratoire
C'est le test de confirmation d'E.coli, par la
production ou non du gaz. Ce test est réalisé par le repiquage de
la bactérie dans le milieu Schubert munie d'une cloche de durham
qui permet de recueillir les gaz produits après 24
à 48 h à 44°C (Boumedjou et Fekih,
2014).
II. 2.1 milieu Schubert avec cloche de Durham II. 3.
Galerie biochimique classique
Elle permet l'étude de plusieurs caractères
biochimiques dont :
· Fermentation des sucres et production de gaz et d'H2S
· Etude de type fermentaire
· Utilisation du mannitol et détermination de la
mobilité
· Utilisation du citrate comme seule source de carbone
etc.
Le principe, les techniques et les règles
d'interprétation des tests effectués sont résumés
dans le tableau 3.
Tableau 3 : Galerie biochimique classique
d'identification d'Escherichia coui (Hennia,
2016).
Milieu /
principe
|
Aspect de
milieu
avant
l'ensemenceme-
nt
|
Mode
d'ensemencem
ent
|
Caractère
recherché
|
Lecture
|
|
|
Le milieu
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|
Mannitol
|
|
Mannitol-mannitol
|
est
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Mobilité
|
|
ensemencé par
|
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. Mannitol (+) :
|
|
|
piqûre centrale à
|
-Fermentation
|
apparition d'une
|
-Principe :
|
|
l'aide d'une
|
de mannitol.
|
coloration jaune.
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|
|
pipette Pasteur
|
-La mobilité.
|
Mannitol (-) :
|
Ce milieu
|
|
chargée de la
|
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milieu reste rouge.
|
permet
l'étude de la
|
|
culture
bactérienne en
|
|
Mobilité
|
fermentation
|
|
milieu semi-
|
|
Mobilité (+) :
|
du mannitol,
il permet
|
|
solide. Incuber à 37°C pendant
|
|
Diffusion de la culture à partir de la
|
aussi la mise
en évidence
de la
mobilité
|
|
24h.
|
|
ligne
d'ensemencement en créant un trouble du
|
bactérienne
|
Laboratoire de
microbiologie 1
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|
milieu
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2020
|
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|
Mobilité (-) : pas de diffusion
|
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Chapitre II Matériel et
méthodes
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Citrate
de
Simmons
|
|
Ce milieu peut
être utilisé aussi
bien en
tube
gélosé incliné
qu'en boîte de
|
- Utilisation
de
Citrate.
|
Citrate (+) :
Virage de milieu au
bleu et une culture
|
-Principe :
|
|
Pétri. Dans les
|
|
de colonie sur la
|
C'est un
milieu gélosé
utilisé
pour
l'identificatio
n des
entérobactéri-
es
par
l'utilisation
du citrate
|
|
deux cas,
ensemencer
légèrement
la
surface du
milieu par stries
et pour les tubes
en pente
jusque
dans le culot,
puis incubation
|
|
pente.
|
comme seule
source de
carbone.
|
Laboratoire de
microbiologie 1
2020
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|
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Ensemencement
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- Lactose.
|
Lactose (+) : virage
|
TSI
|
|
de la pente de la
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- Glucose.
|
de la pente au jaune
|
-Principe :
|
|
gélose par des
stries serrées,
puis le
culot par
|
- saccharose. - Gaz.
- Production
|
(la pente du milieu)
Saccharose (+) :
|
Ce milieu
|
|
piqûre centrale
|
d'H2S.
|
Virage au jaune au
|
permet
|
|
et l'incubation
|
|
milieu de tube (la
|
d'étudier la
fermentation
|
|
est réalisée à
37°C pendant
|
|
pente du milieu).
|
de trois
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|
24h.
|
|
Glucose (+) :
|
sucres
|
|
-Le bouchon de
|
|
Virage de culot au
|
(glucose,
lactose, saccharose), d'apprécier la production ou non de
l'H2S et de noter la production ou non de gaz à
partir du
|
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milieu ne doit pas être trop vissé.
|
|
jaune et bactérie
aéro-anaérobie.
Gaz (+) : apparition
des bulles ou des
poches gazeuses qui décalent la
gélose de fond de tube.
Production d'H2S :
|
glucose.
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Laboratoire de
microbiologie 1
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Noircissement du
milieu.
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2020
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