Chapitre II Matériel et méthodes
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II. 4. Galerie API 20 E
Après une identification des souches par la galerie
biochimique classique nous avons procédé à une autre
identification Par la galerie API 20 E pour la confirmation des
résultats.
-Principe d'API 20 E
La galerie API 20E est un système pour
l'identification des Enterobacteriaceae et autres bacilles Gram négatif,
utilisant 20 tests biochimiques miniaturisés, prêt à
l'emploi et standardisé. En effet, cette galerie comporte 20 micro-tubes
contenant des substrats déshydratés. Au-dessous de chaque tube,
un sigle indique la nature du test. Les tubes sont ensemencés avec une
suspension bactérienne effectuée en eau physiologique (milieu
"Suspension Medium"). Les réactions produites au cours de la
période d'incubation se traduisent par des virages colorés
spontanés ou révélés par l'addition de
réactifs (Bouchaala, 2017).
- Un fond et un couvercle complètent
la galerie et permettent de constituer une boîte d'incubation.
- Galerie API 20 E permet d'effectuer les tests 20 tests
biochimiques (Annexe 3)
- La galerie permet également la recherche de la nitrate
réductase qui se fait dans le Microtubule "GLU" (Bouchaala,
2017).
- Mode opératoire :
L'opération s'effectuée selon les étapes
suivantes :
· Placer de l'eau dans les alvéoles
présents dans le fond de la boite afin de créer une
atmosphère humide.
· Retirer la galerie de son emballage et la placer dans
le fond de la boîte.
· Prélever à l'aide d'une pipette Pasteur
boutonnée une colonie parfaitement isolée Dissocier soigneusement
la colonie dans une ampoule de "suspension Medium".
· A l'aide d'une micro-pipette remplir les micro-tubes
de la galerie. Au sein des micro-tubes, le fabriquant distingue deux parties,
le tube et la cupule. Selon les tests, la suspension bactérienne doit
être placée uniquement dans le tube ou dans le tube et la cupule
(Annexe 3).
· Refermer la boîte d'incubation, écrire
les références du prélèvement sur la languette du
fond de la boîte et placer la boîte à 37°C durant 24 h
(Bouchaala, 2017).
-lecture :
- Sortir la boîte de l'étuve et noter sur la
fiche de lecture les résultats obtenus pour les tests à lecture
spontanée.
- Révéler les tests nécessitant l'addition
de réactifs. - Noter les résultats sur la fiche de lecture.
Chapitre II Matériel et
méthodes
- Indiquer le profil numérique (Bouchaala,
2017)
4.2.3. Standardisation McFarland 0.5
Selon les recommandations du Comité de l'antibiogramme
de la Société Française de Microbiologie (CA-SFM /
EUCAST, 2020). La standardisation McFarland 0.5 est :
A partir d'une culture visible, réaliser une
suspension bactérienne en solution salée pour atteindre une
turbidité équivalente à celle de l'étalon 0,5 de la
gamme de McFarland, ce qui correspond à un inoculum d'environ 1 à
2 x108 UFC/ml pour Escherichia coui.
La suspension bactérienne est standardisée
à l'aide du témoin 0,5 McFarland. Un inoculum lourd engendre des
diamètres plus petits et inversement.
Il est recommandé d'employer un
spectrophotomètre pour ajuster l'inoculum. Cet appareil doit être
calibré contre un étalon de la gamme de McFarland selon les
recommandations du fabricant.
On peut également comparer à l'oeil nu la
turbidité de la suspension bactérienne à celle de
l'étalon 0,5 de la gamme de McFarland. Dans ce cas agiter vigoureusement
l'étalon de turbidité sur un Vortex avant usage Pour faciliter la
comparaison des deux échantillons, se placer face à un fond blanc
avec des lignes noires.
Pour ajuster la densité bactérienne au tube 0,5
McFarland, ajouter soit la solution salée soit les bactéries
(Annexe 5).
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