Annexe 02 : Matériels
I. Matériels biologiques :
I. Les dattes :
Caractères spécifiques pour dattes Hmira
:
Nom vernaculaire : Hamraya ou Hamraye selon les
localités ; origine de nom ; sa couleur rouge de sa maturation.
Couleur au stade maturité totale : Noire
avec reflets rouge vifs importance et abondance : fréquent dans toutes
les palmeraies du sud - est et plus abondant dans le bassin du souf (bas
Sahara).
Dattes de maturation : fin de septembre
à fin octobre selon terroir.
Mode de consommation : fraiche en l'état
à un stade de pré maturation ; concassée et tassée
dans des sacs en cuir, en tissu.
Appréciation : appréciée
surtout en tant que primeur.
Conservation : fort aptitude de conservation
notamment sous vide pour une longue période de 6 à 12 mois.
Degré de commercialisation : peu
demandée, elle surtout consommée localement car peu connue.
Taille moyenne de la datte : 4/1.6 (cm).
Poids moyenne de la datte : 8 g.
Datte charnue convient à la fabrication de la
patte de datte (Omar El Barnaoui(C.R.S.T.R.A).
II. Les raisins ;
Critère de classification des raisins selon
Bétail et Jardinage : Forme de baies-variété
anniversaire Novotcherkassk
Souvent, plusieurs autres conteurs sont ajoutés
à cette classification :
[ANNEXES 02]
Annexes
À coté convexes ; cylindrique ; mamelon ; pointu ;
émoussé ; la forme correcte ; faucille ; à sens
unique.
II. Matériels du labo
II.1. Verrerie
Béchers-Entonnoirs-Eprouvette graduée-Erlen
Meyer-Fioles-Mortiers-Papier filtre-Pipettes Pasteur -Spatules-Tubes à
éssai -Mortie.
II.2.
Appareillage
Figure n°35 : Balance électrique
(DENVER INSTRUMENT / S-403).
Figure n°36 : Réfractomètre
(ADJUTEMNT) .
Figure n°37 : Appareille multi
paramètres « mesure O2 »(CONSORT).
Figure n°38 : Appareille
Conductimètres (HANNA INSTRUMENT).
Figure n°39 : PH mètre
(PHS-25CWMICROCESSOR pH/mV MESTER).
[ANNEXES 02]
Annexes
Figure n°40 :
Rota-vapeur(Stuart).
Figure n°41 : Pynctomètre.
[ANNEXES 02]
Annexes
Figure n°42 : Four à
moufle(Heraeus).
Figure n°43 : Centrifugeuse
(Minifuge RF).
Figure n°44 : Alcoomètre.
[ANNEXES 02]
Annexes
Figure n°46 : Four Pasteur
(FALC-INSTRULENT).
Figure n°45 : Viscosimètre
(Thermo).
Figure n°47 : Incubateur
(memmert).
[ANNEXES 02]
Annexes
Figure n°49 : Spectrophotomètre
(UV mini-1240).
Figure n°48 : Autoclave
(Systec).
[ANNEXES 02]
Annexes
Figure n°50 : Microscope optique bi
oculaire (OPTIKA / B-150/ITALY).
Figure n°51 : Déssiccateure.
[ANNEXES 03]
Annexes
Milieux des cultures
1-Milieux d'isolements Milieu Frateur
|
Carbonate de Calcium
|
20 g
|
|
Extrait de levure
|
30 g
|
|
Agar
|
20 g
|
|
Eau distillée
|
1000 ml
|
-Après stérilisation (autoclavage) à
110°C pendant 10 min le milieu est lassai refroidir jusqu'à
45°C, puis on ajoute 100 ml d'alcool éthyliques à 15%.
2-Milieux des identifications Milieu de Carr
|
Extrait de levure
|
30 g
|
|
Agar
|
20 g
|
|
Vert de bromocrésol
|
1 ml
|
|
L'eau distillée
|
1000 ml
|
-Après stérilisation (autoclavage) à
110°C pendant 10 min le milieu est lassai refroidir jusqu'à
45°C, puis on ajoute 100 ml d'alcool éthyliques à 20%.
Milieu gélosé au glycérol : test de
pouvoir cétogène
|
Extrait de levure
|
30 g
|
|
Glycérol
|
30 g
|
|
Agar
|
20 g
|
|
L'eau distillée
|
1000 ml
|
-Autoclavage pendant 15°C durant 10 min le milieu lassai
refroidir jusqu'à45°C. le milieu ainsi refroidis, on ajoute 100 ml
d'alcool éthyliques à15%.
Milieux de test de Hoyer
Milieu Hoyer-Frateur avec ammonium
|
Sulfate d'ammonium
|
1 g
|
|
Phosphate di potassique
|
0.1 g
|
|
Phosphate mono potassique
|
0.9 g
|
|
Sulfate de magnésium
|
0.025 g
|
|
Perchlorure de fer
|
0.02 mg
|
|
L'eau distillée
|
1000 ml
|
[ANNEXES 03]
Annexes
[ANNEXES 03]
Annexes
-Repartir ce milieu en tubes a essai (09ml) puis en autoclave 15
min a 120C°.
-Avant l'emploi, ajouter dans chaque tube de milieu 1 ml d'une
solution stérilisée par filtration d'éthanol a 30%.
Milieu Hoyer-Frateur sans ammonium
|
Phosphate di potassique
|
0.1 g
|
|
Phosphate mono potassique
|
0.9 g
|
|
Sulfate de magnésium
|
0.025 g
|
|
Perchlorure de fer
|
0.02 mg
|
|
L'eau distillée
|
1000 ml
|
-Repartir ce milieu en tubes a essai (09ml) puis en autoclave 15
min a 120C°.
-Avant l'emploi, ajouter dans chaque tube de milieu 1 ml d'une
solution stérilisée par filtration d'éthanol a 30%.
Milieu test de pigmentation
|
Extrait de levure
|
30 g
|
|
Carbonate de calcium
|
20 g
|
|
Glucose
|
20 g
|
|
Agar
|
20 g
|
|
L'eau distillée
|
1000 ml
|
-Avant l'emploi autoclave a 120C° pendant 15 min.
Milieu gélosé carbonaté solide
« bactérie acétique » (milieu de test d'acide
gluconique)
|
Extrait de levure
|
10 g
|
|
Carbonate de calcium
|
20 g
|
|
Glucose
|
100 g
|
|
Agar
|
25 g
|
|
L'eau distillée
|
1000 ml
|
-Après stérilisation (autoclavage) à
110°C pendant 10 min le milieu est lassai refroidir jusqu'à
45°C, puis on ajoute 100 ml d'alcool éthyliques à 15%.
Bouillon Haynes (milieu test de formation d'acide
cétogluconique)
|
Extrait de levure
|
1 g
|
|
Peptone
|
1.5 g
|
|
Phosphate di potassique
|
1 g
|
|
Glucose
|
40 g
|
|
L'eau distillée
|
1000 ml
|
-Stérilisation à l'autoclave a 120C° pendant
15 min.
Bouillon pour les bactéries (milieu teste de
production de cellulose)
|
Extrait de levure
|
10 g
|
|
Carbonate de calcium
|
20 g
|
|
Glucose
|
100 g
|
|
L'eau distillée
|
1000 ml
|
-Répartir en tubes à essais 09 à 10 ml de ce
milieu.
- Stérilisation à l'autoclave a 120C° pendant
15 min.
Milieu Mannitol-mobilité (dégradation de
mannitol et observation de la mobilité)
|
Peptone
|
20 g
|
|
Nitrate de potassium
|
1 g
|
|
Mannitol
|
2 g
|
|
Rouge de phénol
|
40 mg
|
|
Gélose
|
4 g
|
|
L'eau distillée
|
1000 ml
|
|
PH
|
7.6
|
[ANNEXES 03]
Annexes
-Répartir en tubes à essais (8 à 10
ml).
-Autoclave 15 min à120 °C. Solidifier en culot.
3-Milieux pour dénombrements
Milieu gélose nutritive ordinaire « milieu
GNO » « nutrient agar »
|
Peptone
|
10 g
|
|
Extrait de viande
|
5 g
|
|
Chlorure de sodium
|
5 g
|
|
Agar
|
15 g
|
|
L'eau distillée
|
1000 ml
|
|
PH
|
7.2
|
-Autoclaver 20 minutes à 120 °C. Milieu
MRS
|
Peptone
|
10 g
|
|
Extrait de viande
|
10 g
|
|
Extrait de levure
|
5 g
|
|
Glucose
|
20 g
|
|
Tween 80 « polysorbate 80 »
|
1 ml
|
|
Phosphate di potassique
|
2 g
|
|
Acétate de sodium
|
5 g
|
|
Citrate triammonique
|
2 g
|
|
Sulfate de magnésium
|
200 mg
|
|
Sulfate de manganèse
|
50 mg
|
|
Peptone
|
10 g
|
|
Agar
|
20 g
|
|
L'eau distillée
|
1000 ml
|
|
PH
|
6.5
|
[ANNEXES 03]
Annexes
-Répartir en tubes à essais (7 à 10 ml).
-Autoclaver 15 minutes à 120°C. Milieu
Sabouraud
|
Peptone de viande
|
5 g
|
|
Peptone de caséine
|
5 g
|
|
Glucose
|
20 g
|
|
Agar
|
15 g
|
|
L'eau distillée
|
1000 ml
|
|
PH
|
6.3
|
-Autoclaver 20 minutes à 120°C. Milieu
TGEA
|
Tryptone
|
5 g
|
|
Extrait de levure
|
2.5 g
|
|
Glucose
|
9 à 18 g
|
|
Agar
|
20 g
|
|
L'eau distillée
|
1000 ml
|
-Autoclaver 20 minutes à 120°C.
Conservateur
Bouillon nutritif « BN » « Nutrient broth
»
|
Peptone
|
10 g
|
|
Extrait de viande
|
5 g
|
|
Chlorure de sodium (facultatif selon la
formule)
|
5 g
|
|
L'eau distillée
|
1000 ml
|
|
PH
|
7.2
|
[ANNEXES 03]
Annexes
-Autoclaver 20 minutes à 120°C.
Diluant
Eau physiologique « sérum physiologique
»
|
Chlorure de sodium
|
8.5 g
|
|
L'eau distillée
|
1000 ml
|
- Stérilisation à l'autoclave a 120C° pendant
15 min.
Solution chimique
NaOH 0.1 N
|
NaOH
|
4 g
|
|
L'eau distillée
|
100 ml
|
Liqueur de Fehling
Mélanger avants emploi volume à volume des deux
solutions suivantes :
*Solution 1 :
|
Sulfate de cuivre
|
70 g
|
|
Soude caustique
|
100 g
|
|
Eau distillée
|
100 ml
|
*Solution 2 :
|
Tartrate double de sodium et potassium
|
350 g
|
|
Eau distillée
|
1000 ml
|
HCL 0.1N
|
HCL
|
3.65 g
|
|
Eau distillée
|
1000 ml
|
[ANNEXES 03]
Annexes
[ANNEXES 03]
Annexes
Réactif de Bénédict
*Solution 1 :
|
Eau distillé chaud
|
60 ml
|
|
Citrate sodique
|
17.3 g
|
|
Carbonate sodique anhydre Na2CO3
|
9 g
|
-Filtrer et amener à 85 ml avec l'eau distillée.
*Solution 2 :
|
Eau distillé
|
150 ml
|
|
CuSO4
|
17.3 g
|
-Mélanger la solution (1) et 15 ml de la solution (2)
lentement en agitant le mélange. Bleu de méthylène
(réactif de coloration simple)
|
Bleu de méthylène
|
1.5 g
|
|
Acide phénique
|
1 g
|
|
Alcool absolu
|
10 ml
|
|
Eau distillée
|
100 ml
|
-Broyer dans un mortier le colorant dans l'alcool .Ajouter peu
à peu l'eau phéniquée préparée à
part, en continuant à broyer (la solution doit être
filtrée).
Phénolphtaléine
|
Phénolphtaléine
|
1 g
|
|
Alcool éthylique à 95°
|
100 ml
|
Réactif nitrochromique à ??
??e mol. L-??
|
Dichromate de potassium
|
4 g
|
|
Acide nitrique
|
2 ml
|
|
Eau distillée
|
1000 ml
|
[ANNEXES 04]
Annexes
Analyse statistique de la densité optique (DO)
de dosage de ST des échantillons (datte, raisin, V. de datte, V. de
raisin) :
|
VD
|
VR
|
D
|
R
|
|
T0
|
0,2
|
2
|
2,08
|
0,452
|
|
T0
|
1,48
|
0,002
|
4
|
2,83
|
|
T0
|
1,48
|
0,004
|
4
|
1,1
|
|
T1
|
0,09
|
4
|
1,87
|
0,339
|
|
T1
|
0,049
|
0,14
|
2
|
0,13
|
|
T1
|
0,005
|
0,12
|
0,312
|
0,012
|
|
T2
|
0,008
|
1,63
|
0,022
|
0,26
|
|
T2
|
0,034
|
0,096
|
1,9
|
0,123
|
|
T2
|
0,004
|
0,046
|
2
|
0,15
|
|
T3
|
0,0038
|
0,09
|
0,055
|
0,211
|
|
T3
|
0,1
|
0,08
|
1,015
|
0,125
|
|
T3
|
0,035
|
0,037
|
1,98
|
0,047
|
|
T4
|
0,005
|
0,008
|
0,054
|
0,155
|
|
T4
|
0,18
|
0,079
|
1
|
0,018
|
|
T4
|
0,031
|
0,053
|
1,5
|
0,011
|
|
T5
|
0,004
|
0,092
|
0,01
|
0,137
|
|
T5
|
0,172
|
0,074
|
0,05
|
0,01
|
|
T5
|
0,02
|
0,1
|
1
|
0,012
|
|
Moyenne
|
0,21671111
|
0,48061111
|
1,38044444
|
0,34011111
|
|
Ecart type
|
0,46411464
|
1,04581542
|
1,24709098
|
0,67231277
|
|
Moyenne T0
|
1,05333333
|
0,66866667
|
3,36
|
1,46066667
|
|
Ecartype T0
|
0,73900834
|
1,15296892
|
1,10851252
|
1,22934183
|
|
Moyenne T1
|
0,048
|
1,42
|
1,394
|
0,16033333
|
|
[ANNEXES 04]
|
|
|
|
Annexes
|
|
Ecartype T1
|
0,04250882
|
2,23436792
|
0,93929122
|
0,1655969
|
|
MoyenneT2
|
0,01533333
|
0,59066667
|
1,30733333
|
0,17766667
|
|
Ecartype T2
|
0,01628906
|
0,90043619
|
1,11425371
|
0,07256951
|
|
Moyenne T3
|
0,04626667
|
0,069
|
1,01666667
|
0,12766667
|
|
Ecartype T3
|
0,04907966
|
0,02816026
|
0,96250108
|
0,08203251
|
|
Moyenne T4
|
0,072
|
0,04666667
|
0,85133333
|
0,06133333
|
|
EcartypeT4
|
0,09442987
|
0,03592121
|
0,73437411
|
0,08119319
|
|
Moyenne T5
|
0,06533333
|
0,08866667
|
0,35333333
|
0,053
|
|
Ecartype T5
|
0,09272181
|
0,01331666
|
0,56038677
|
0,07275301
|
Analyse de variance: deux facteurs avec
répétition d'expérience
|
RAPPORT DÉTAILLÉ
T0
|
VD
|
VR
|
D
|
R
|
Total
|
|
Nombre d'échantillons 3
|
3
|
3
|
3
|
12
|
|
Somme
|
3,16
|
2,006
|
10,08
|
4,382
|
19,628
|
|
Moyenne
|
1,05333333
|
0,66866667
|
3,36
|
1,46066667
|
1,63566667
|
|
Variance
|
0,54613333
|
1,32933733
|
1,2288
|
1,51128133
|
2,00595988
|
|
T1
|
|
|
|
|
|
|
Nombre d'échantillons 3
|
3
|
3
|
3
|
12
|
|
Somme
|
0,144
|
4,26
|
4,182
|
0,481
|
9,067
|
|
Moyenne
|
0,048
|
1,42
|
1,394
|
0,16033333
|
0,75558333
|
|
Variance
|
0,001807
|
4,9924
|
0,882268
|
0,02742233
|
1,53816917
|
|
T2
|
|
|
|
|
|
|
Nombre d'échantillons 3
|
3
|
3
|
3
|
12
|
|
Somme
|
0,046
|
1,772
|
3,922
|
0,533
|
6,273
|
|
[ANNEXES 04]
|
|
|
Annexes
|
|
|
|
Moyenne
|
0,01533333
|
0,59066667
|
1,30733333
|
0,17766667
|
0,52275
|
|
Variance
|
0,00026533
|
0,81078533
|
1,24156133
|
0,00526633
|
0,6459973
|
|
T3
|
|
|
|
|
|
|
Nombre d'échantillons 3
|
3
|
3
|
3
|
12
|
|
Somme
|
0,1388
|
0,207
|
3,05
|
0,383
|
3,7788
|
|
Moyenne
|
0,04626667
|
0,069
|
1,01666667
|
0,12766667
|
0,3149
|
|
Variance
|
0,00240881
|
0,000793
|
0,92640833
|
0,00672933
|
0,35028812
|
|
T4
|
|
|
|
|
|
|
Nombre d'échantillons 3
|
3
|
3
|
3
|
12
|
|
Somme
|
0,216
|
0,14
|
2,554
|
0,184
|
3,094
|
|
Moyenne
|
0,072
|
0,04666667
|
0,85133333
|
0,06133333
|
0,25783333
|
|
Variance
|
0,008917
|
0,00129033
|
0,53930533
|
0,00659233
|
0,22928633
|
|
T5
|
|
|
|
|
|
|
Nombre d'échantillons 3
|
3
|
3
|
3
|
12
|
|
Somme
|
0,196
|
0,266
|
1,06
|
0,159
|
1,681
|
|
Moyenne
|
0,06533333
|
0,08866667
|
0,35333333
|
0,053
|
0,14008333
|
|
Variance
|
0,00859733
|
0,00017733
|
0,31403333
|
0,005293
|
0,07637027
|
|
Total
|
|
|
|
|
|
|
Nombre d'échantillons
|
18
|
18
|
18
|
18
|
|
|
Somme
|
3,9008
|
8,651
|
24,848
|
6,122
|
|
|
Moyenne
|
0,21671111
|
0,48061111
|
1,38044444
|
0,34011111
|
|
|
Variance
|
0,2154024
|
1,0937299
|
1,55523591
|
0,45200446
|
|
|
ANALYSE DE VARIANCE :
|
|
|
|
|
|
Source des variations
|
Somme des carrés
|
Degré de liberté Moyenne des
carrés
|
F
|
Probabilité
|
|
Échantillon
|
18,1505124
|
5 3,63010249
|
6,05106454
|
0,00020263
|
|
[ANNEXES 04]
|
Annexes
|
|
Colonnes 15,0789589 3 5,02631965 8,37843689
0,00013926
Interaction 9,43207651 15 0,6288051
1,04816331 0,42649141
A l'intérieur du
groupe 28,7957463 48 0,59991138
Total 71,4572942 71
Df Sum Sq Mean Sq F value Pr(>F)
Dose 5 18,1505124 3,63010249 6,05106454
0,00020263
Traitement 3 15,0789589 5,02631965 8,37843689
0,00013926
Dose:Traitement 15 9,43207651 0,6288051
1,04816331 0,42649141
Residuals 48 28,7957463 0,59991138 NA NA
Post hoc test: Honesty Signicance Difference de Tukey
(HSDT): Multiple Comparisons: Tukey
Valeur groups
T0 1,6357 a
T1 0,7556 ab
T2 0,5228 b
T3 0,3149 b
T4 0,2578 b
T5 0,1401 b
Valeur groups
D 1,3804 a
VR 0,4806 b
R 0,3401 b
VD 0,2167 b
Valeur groups
[ANNEXES 04]
Annexes
T0:D 3,3600 a
T0:R 1,4607 ab
T1:VR 1,4200 ab
T1:D 1,3940 ab
T2:D 1,3073 ab
T0:VD 1,0533 ab
T3:D 1,0167 ab
T4:D 0,8513 b
T0:VR 0,6687 b
T2:VR 0,5907 b
T5:D 0,3533 b
T2:R 0,1777 b
T1:R 0,1603 b
T3:R 0,1277 b
T5:VR 0,0887 b
T4:VD 0,0720 b
T3:VR 0,0690 b
T5:VD 0,0653 b
T4:R 0,0613 b
T5:R 0,0530 b
T1:VD 0,0480 b
T4:VR 0,0467 b
T3:VD 0,0463 b
T2:VD 0,0153 b
Isolement et identification d'Acetobacter aceti à
partir d'un vinaigre biologique.
Mots clés: vinaigre biologique, dattes, raisin,
bactéries acétiques, Acétobacter,
thermotolérances.
Résumé :
Les dattes et les raisins possèdent une grande
importance dans la fabrication alimentaire, parmi lesquels l'élaboration
du vinaigre traditionnel et ou biologique. Ce vinaigre est obtenu par une
double fermentation simultanée, alcoolique et acétique. Les
résultats de notre étude dont l'objectif est la fa la recherche
et identification des bactéries acétiques issues du vinaigre
biologique de dattes du cultivas Hmira et de raisin variété rouge
autochtone, ont permet déterminer la qualité microbiologique et
physico-chimique des dattes et raisin et leurs deux vinaigre obtenues .et
éssentiellemt d'isolement et identification d'espèce
Acétobacter aceti et de la sous -espèces :
Acétobacter subsp aceti aceti et les autres espèces de
même genre Acetobacter, et l'étude de la
thermotolérance des souches obtenues, montre leur croissance à
des températures aux alentours de 25°C à 45°C, dont
elles tolèrent.
Isolation and identification of Acetobacter aceti from
organic vinegar.
Abstract:
Dates and grapes haves a great importance in food
manufacturing, among which the elaboration of traditional and or organic
vinegar. This vinegar is obtained bay simultaneous double fermentation,
alcoholic and acetic. The results of our study, the objective of which is
research and identification of acetic bacteria resulting from the organic
vinegar of dates of the Hmira and of the indigenous and variety grape, have
made it possible to determine the microbiological and physiochemical quality of
dates and grapes and their two, vinegar obtained and essentially isolation and
identification of Acetobacter aceti species and of the subspecies:
Acétobacter subsp aceti aceti and other species of the same
genus Acetobacter, and the study of the thermotolerance of the
obtained strains, shows their growth at temperatures around 25°C to
45°C, which they tolerate.
Keywords : organic vinegar, dates, grapes, acetic bacteria,
Acetobacter, thermotolerances.
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Acetobacter aceti ,.,.,_; s Ji=
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