2.7.2.3. Détermination du cholestérol de
la Lp(a)
La Lp(a) est habituellement dosée par des
méthodes immunologiques basées sur l'antigénicité
de l'apo(a). Or les autres lipoprotéines sont fréquemment
évaluées par leur contenu en cholestérol, mesuré
après séparation par des méthodes physicochimiques telles
que l'ultracentrifugation, l'électrophorèse, ou la
précipitation sélective. Ainsi la précipitation
sélective par l'acide phosphotungstique en présence d'ions Mg++
permet un dosage du cholestérol des HDL et une estimation par la formule
de Friedwald, du cholestérol des LDL (C-LDL). Cette estimation
correspond en réalité au cholestérol transporté par
les LDL, les éventuelles IDL et par la Lp(a).
Or, à concentrations de C-LDL égales on
peut s'attendre à un risque vasculaire différent selon la
présence ou non de la Lp(a). Afin de mieux évaluer le risque il
apparaît donc
Thèse Docteur Pharmacie La lipoprotéine Lp(a) :
son intérêt dans l'interprétation du bilan lipidique Dr
GUIMONT MC 146/271 Lipides, Lipoprotéine (a),
Hyperlipoprotéinémie, Athérosclérose, Lipids,
Lipoprotein, Lpa, Hyperlipoproteinemia, Atherosclerosis
Thèse Docteur Pharmacie La lipoprotéine Lp(a) :
son intérêt dans l'interprétation du bilan lipidique Dr
GUIMONT MC 147/271 Lipides, Lipoprotéine (a),
Hyperlipoprotéinémie, Athérosclérose, Lipids,
Lipoprotein, Lpa, Hyperlipoproteinemia, Atherosclerosis
important de pouvoir distinguer ces deux situations.
De plus le dosage du cholestérol de la Lp(a) [C-Lp(a)], permettrait des
comparaisons directes avec les autres fractions lipoprotéiques du
plasma.
Méthode électrophorétique avec
révélation enzymatique du cholestérol
Après ultracentrifugation du sérum
à une densité de 1,006 , une électrophorèse en gel
d'agarose est effectuée sur le sous-nageant pour séparer LDL,
Lp(a) et HDL. Le cholestérol est ensuite révélé
avec un réactif renfermant la cholestérol
déshydrogénase et le nitrobleu de tetrazolium. Puis les gels sont
intégrés à 570 nm.
La sensibilité de la méthode est de 30
mg/I de cholestérol-Lp(a), ce qui correspond à environ 0,10 g/I
de Lp(a) masse. Cette méthode a permis de montrer que le
cholestérol représente environ 29 p.cent du poids de la
Lp(a).
Nauck et al. ont déterminé le C-Lp(a) et
dosé la Lp(a) chez 117 patients atteints de maladie coronarienne et chez
276 témoins cliniquement sains. En comparant le pouvoir discriminant de
ces 2 dosages, les valeurs seuil sont respectivement de 0,10 et 0,30 g/I. Le
rapport C-Lp(a) / Lp(a) se révèle plus faible chez les malades
que chez les témoins 299.
Méthode utilisant l'affinité de la Lp(a)
pour les lectines
Elle est basée sur les données suivantes
:
- l'apo(a) est une des protéines plasmatiques
les plus fortement glycosylées (25 à 40 p.cent de son poids) avec
notamment d'abondants éléments N-acéthylglucosamines et
N-acéthylneuraminiques terminaux. Ces oligosaccharides sont d'excellents
ligands pour une lectine particulière, l'agglutinine du germe de
blé.
- la Lp(a) est principalement retrouvée, en
ultracentrifugation, dans la zone de densité 1,050 - 1,120 , mais on
peut en trouver dans la zone des VLDL (2 à 9 p.cent) ainsi qu'aux
densités supérieures à 1,210 (1 à 5
p.cent).
En pratique la méthode comprend 2 étapes
:
- Incubation du plasma total avec la lectine (7 g/1)
liée à un gel d'agarose à 4 p.cent. Après plusieurs
lavages, les échantillons sont incubés en présence d'une
solution tampon contenant de la N-acéthylglucosamine (0,2 mol/1) pour
dissocier la Lp(a) de sa liaison avec la lectine.
- le dosage du cholestérol est ensuite
effectué sur l'éluat en utilisant un réactif et un
standard adapté à des mesures de concentrations comprises entre
20 et 250 mg/I. La sensibilité de la méthodes est de 15 mg/I de
C-Lp(a), ce qui correspond à environ 0,05 g/I de Lp(a) masse
300
L'étude de Seman compare le C-Lp(a) et la Lp(a)
dosée par ELISA chez 47 sujets à jeun
normotriglycéridémiques et ayant des concentrations de Lp(a)
étalées (m = 0,446 #177; 0,350
g/I). La moyenne des concentrations de C-Lp(a) est de 110
#177; 89 mg/I. La valeur de la pente de la droite de régression (3,98)
suggère que la Lp(a) est constituée de 25 p.cent de
cholestérol en masse, ce qui est en accord avec les autres estimations
de la littérature (26 à 34 p.cent). Les auteurs remarquent que le
choix de la population étudiée sélectionne des
concentrations élevées de Lp(a) ce qui a peut être induit
une surreprésentation des Lp(a) avec petites isoformes d'apo(a).
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