On s'est rapidement aperçu que la Lp(a) est
fragile et que lorsqu'elle est conservée à 0°C, elle se
dissocie en une particule de type LDL et une protéine
apo(a).
En étudiant l'éventuelle
activité enzymatique de la Lp(a), Jurgens constate que la Lp(a)
préparée en l'absence d'inhibiteur des protéases, a
tendance à s'agréger (troubles dans les solutions) et à
précipiter au cours de sa préparation 124.
Thèse Docteur Pharmacie La lipoprotéine Lp(a) :
son intérêt dans l'interprétation du bilan lipidique Dr
GUIMONT MC 72/271 Lipides, Lipoprotéine (a),
Hyperlipoprotéinémie, Athérosclérose, Lipids,
Lipoprotein, Lpa, Hyperlipoproteinemia, Atherosclerosis
Thèse Docteur Pharmacie La lipoprotéine Lp(a)
: son intérêt dans l'interprétation du bilan lipidique Dr
GUIMONT MC 73/271 Lipides, Lipoprotéine (a),
Hyperlipoprotéinémie, Athérosclérose, Lipids,
Lipoprotein, Lpa, Hyperlipoproteinemia, Atherosclerosis
Les profils obtenus par électrophorèse
sur gel de polyacrylamide (PAGE) de ces préparations montrent de
nombreuses bandes de poids moléculaire variables.
En présence d'inhibiteurs, au contraire, les
solutions restent claires durant les différentes étapes de la
préparation, la Lp(a) ainsi obtenue donne une seule bande par PAGE, mais
l'activité enzymatique recherchée est perdue.
La Lp(a) isolée et purifiée n'est pas
stable à 4°C, ceci quelque soit le mode de préparation
utilisé. Placée à 4°C dans un but de conservation, la
Lp(a) commence à précipiter aux environs de 15°C. Ce
phénomène est partiellement réversible et dépend de
la concentration. Parvenue à 4°C, la Lp(a) continue de
précipiter jusqu'à ce que sa concentration dans la solution soit
de 1 à 2 g/I. A cette concentration et en dessous, les solutions de
Lp(a) sont stables à 4°C. Tout ceci contraste nettement avec le
comportement de toutes les autres fractions lipoprotéiniques connues
dans le sérum humain 120.
En étudiant
l'hétérogénéité de la Lp(a), Fless constate
que parmi les Lp(a) qu'il a isolées, les plus denses (1,082)
s'agrègent au froid alors qu'aucune des Lp(a) de faible densité
(1,050) ne le fait. Il évalue la turbidité d'une solution de
Lp(a) de densité égale à 1,082, par mesure de
l'augmentation d'absorbance à 600 nm : le trouble apparaît
à 13°C et augmente linéairement jusque vers
0°C.
La succinylation clarifie immédiatement les
solutions et empêche l'agrégation 118.
Fless relie le phénomène
d'agrégation à des différences de structure secondaire des
apoprotéines des Lp(a), les Lp(a) s'autoagrégant ont un
pourcentage d'hélice alpha moindre (34p.cent) et un pourcentage de
structure désordonnée plus important
(54 p.cent) que celles qui ne s'agrègent pas
(38 p.cent et 50 p.cent respectivement).
La Lp(a) purifiée sans inhibiteurs de
protéases, montre des propriétés estérolytiques et
protéolytiques pendant l'isolement. Dans ces conditions, les apo(a) sont
dégradées en multiples peptides, la plupart des antigènes
spécifiques de la Lp(a) sont perdus et une importante agrégation
se produit 123.
De plus l'apo(a) isolée dans ces conditions tend
à s'autoassocier et Fless suggère que ce sont les domaines de
l'apo(a) normalement impliqués dans les interactions avec la surface de
la Lp(a) qui sont aussi responsables de l'auto-association de l'apo(a) libre en
solution . Ces phénomènes pourraient avoir
généré des artefacts lors des premières
études.
Par la suite, des études confirmèrent
l'instabilité des préparations de Lp(a) purifiées, et la
nécessité de travailler en présence d'inhibiteurs des
protéases (aprotinine) et de conservateurs, dès le
prélèvement et à toutes les étapes.
