PARTIE C (EXPERiMENTALE)
C-1 :
Généralité
Tableau : C-1 : Les
Réactifs et Solvants utilisées
|
Réactifs et solvants
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Structure
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Tf
( °C)
|
M
(g/mole)
|
Densité
|
Origine
|
Teb
(°C)
|
|
Acide L(+) tartrique
|
COOH(CHOH)2COOH
|
170
|
150.09
|
-
|
Prolabo
|
-
|
|
L(+) Arabinose
|
C5H10O5
|
153-164
|
150.13
|
-
|
-
|
-
|
|
Acide sulfurique
|
H2SO4
|
-
|
98.07
|
1.84
|
Organics*
|
-
|
|
Acide chlorhydrique
|
HCl (30 %)
|
-
|
36.46
|
1.15
|
Organics*
|
-
|
|
Bicarbonate de sodium
|
NaHCO3
|
-
|
85.009
|
-
|
Biochem**
|
-
|
|
Hydroxyde de potassium
|
KOH
|
-
|
65.11
|
-
|
Biochem**
|
-
|
|
Hydrazide hydraté (98 %)
|
NH2NH2 .H2O (64%)
|
-
|
50.06
|
1.03
|
-
|
-
|
|
Di sulfure de carbone (99.9%)
|
CS2
|
-
|
76.13
|
1.2621
|
Prolabo
|
-
|
|
Gel de silice
|
SiO2
|
-
|
-
|
-
|
Prolabo
|
-
|
|
Benzène (99.8 %)
|
C6H6
|
5.5
|
78.11
|
0.878-
|
-
|
80.1
|
|
Chloroforme (99.6 %)
|
CHCl3
|
63.5
|
119.38
|
1.478-1.484
|
Prolabo
|
61.2
|
|
Dichlorométhane (99.5 %)
|
CH2Cl2
|
-
|
84.93
|
1.33
|
Prolabo
|
-
|
|
Acétone
|
CH3COCH3
|
-
|
58.08
|
0.79
|
Biochem**
|
-
|
|
Méthanol (98 %)
|
CH3OH
|
-
|
32.04
|
0.79
|
Biochem**
|
-
|
|
Ethanol (95 %)
|
C2H5OH
|
-
|
46.07
|
0.81
|
Biochem**
|
-
|
|
Diméthylesulfoxyde (DMSO) (99%)
|
(CH3)2SO
|
18.4
|
78.13
|
1.84
|
-
|
189
|
|
Chlorure de sodium
|
NaCl
|
-
|
57
|
-
|
-
|
-
|
|
Iode
|
I2
|
-
|
-
|
-
|
Prolabo
|
-
|
C-1-1-Température de
fusion : Les points de fusion(Tf) sont
mesurés dans un capillaire à point de fusion avec un appareil
GALLENKAMP (Tmax= 400 °C) (Laboratoire chimie organique).
C-1-2-Chauffage :
Le mélange réactionnel est porté au
reflux sur un bain d'huile (huile de
silicone).
C-1-3-Chromatographie :
Les CCM sont effectués au moyen de couches minces avec gel
de silice (60A° TLC) GMBHD-3440 ESCHWEGE (PROLABO) sur des plaques en
verre (0,2x7x4) cm, Ces dernières sont préparées au niveau
de notre laboratoire. que l'on active, après séchage, à
100°C pendant 2 heures à l'étuve. La
révélation se fait directement sous atmosphère de
diiode ; Après élution dans le solvant approprié.
Le chromatographie sur papier aluminium est effectué au
moyen des papier aluminium ...
Les éluants utilisés sont :
Éluant A : éthanol /benzène ;
1/4 ;V/V
Éluant B : éthanol / benzène ;
2/1 ; V/V
Éluant C : éthanol / benzène ;
2/1 ; V/V
Éluant D : éthanol / benzène ;
2/1 ; V/V
Éluant E : éthanol / benzène ;
2/2 ; V/V
C-1-4- IR : Les spectres IR ont
été enregistrés sous forme de pastille KBr dans un
spectromètre JASCO FT/IR entre 400 et 4000 cm-1 (laboratoire
de synthese organique appliquer -Université d'Oran) et laboratoire
régional des analyses (central -police).
C-1-5- RMN : les spectres de
résonances magnétiques nucléaires (RMN) ont
été
Enregistrés sur les spectromètres Brucker AC 200
et avance 300 Mhz.
les déplacement chimiques (ä) sont données
en ppm par rapport au pic de solvant
pris comme référence interne.
Organics* : Produit of stinnes chemicals-Deutschland-
Biochem **: (Chemopharma) trucker 30084; Georgia -USA-
C-2 - Synthèse et
Identification :
C-2-1- Préparation de L (+) tartrate de
diéthyles (b-2)
Dans un ballon bicol de 100 ml, muni d'une agitation
magnétique et d'un réfrigérant, on introduit l'acide L(+)
tartrique (b-1, 1.5gm , 0,01 mole) dans l'éthanol 10
ml.
On additionne1 ml d'acide sulfurique concentré. Le
mélange est porté au reflux sur un bain d'huile, à une
température de 110 C°, pendant 7 heures. Rf =
0.41 (éluant A)
La solution est refroidie à l'aide d'un bain de glace,
puis transvasée dans une ampoule à décanter, à la
quelle on a ajouté 15 ml d'une solution aqueuse saturée de NaCl.
Après extraction par dichloro-méthane et après agitation,
on sépare la phase organique. La quantité de l'ester dissoute
dans la phase aqueuse est neutralisée avec une solution de bicarbonate
de sodium jusqu'à pH = 7 puis extraite par le dichlorométhane (3
fois 10ml). Les phases organiques sont rassemblées,
séchées sur sulfate de sodium anhydre Na2SO4
puis filtrées. Le dichlorométhane est éliminé
par évaporation. l'ester L (+) tartrate de
diéthyles est obtenu sous forme d'une huile blanche jaunâtre.
(b-2 ; 1.43gm ; 96%)
IR (KBr) ,í (cm-1) : 3439.6(OH),
1730.1(C=O, ester)
C-2-2- Préparation de di hydrazides L
(+) tartrique (b-3)
Dans un Erlen Meyer de 200 ml muni d'une agitation
magnétique, on introduit
l'ester L (+) tartrate de diéthyles
(b-2 ; 5,0 gm ; 0,025mole). On additionne
d'éthanol 35ml et d'hydrazine hydratée 20 ml respectivement.
Rf = 0.27 (éluant B)
Le mélange réactionnel précipite, la
réaction est considérée comme totale après 25
minutes d'agitation. Après filtration de solide sous pression
réduite. le
produit di hydrazides L (+) tartrique est obtenu,
sous forme de cristaux blanches (b-3 ;
4.2 gm ; 84%) .L'hydrazide est recristallisé dans un
mélange de solvant eau/méthanol.
Tf = 176°C
IR (KBr) ,í (cm-1) : 3422.6 (OH),
1657.1, 1612.3 (C=O ), 3364.1, 3300.2, 3294.4 (NH, liaison),
3175.2 (CH alkyl
chaine)
C-2-3- Préparation de bis-1,
3,4-oxadiazole-5-thione (b-4)
Dans un ballon tri col de 250 ml, muni d'une
agitation magnétique et d'un reflux ;
on place di hydrazides L (+)
tartrique (b-3; 5 gm ; 0.028 mole) dissoute dans
d'eau distillée 30 ml, on additionne de KOH (10 g dissoute dans d'eau
distillée 10 ml), puis on y ajoute lentement le CS2 (80 ml),
La solution se colore en orange. Le mélange est porté au reflux
sur un bain d'huile à une température de 110 °C, pendant
4heure. Rf = 0.62 (éluant C)
La solution est refroidie à la température
ambiante puis acidifiée avec de l'acide chlorhydrique HCl (30 %)
jusqu'à pH = 5.
Après filtration de solide, l'excès de solvant
et réactif (eau et CS2) est évaporé sur un
bain d'huile ; Le résidu est lavé trois
fois par d'acétone (50 ml).
Après recristallisation de solide le bis-1,
3,4-oxadiazole-5-thione (b-4 ;
3.6gm ; 72%) est obtenu sous forme : des fibres jaunes
blanches.
Tf = 186 °C
IR (KBr) ,í (cm-1) : 3463.2 (OH),
1459.6 ,1406,1 (C=S ), 1634 (C=N) , 3350,2 , 3230 (NH),
3051.2, 2890 (CH alkyl
chaine), 1093.8 ( C-O-C)
C-2-4- Préparation de
bis-(4-amino-5-mercapto-4H-[1,2,4] triazol-3-yl)acide
tartrqiue(b-5)
Le di hydrazides L (+) tartrique
(b-3 ; 5gm ; 0.028 mole) a
été ajouté à l'alcool CH3OH absolu
(35ml) ; contenant de KOH (1.5 gm) à la température
ambiante. le bisulfure de carbone CS2 10ml a été
ajouté et le mélange a été remué à la
température ambiante pour 17 h.
Le mélange a été dilué avec
déchlorométhane (20ml) et remué pour un autre 1h.
Rf = 0.80 (éluant
D)
L'hydrate d'hydrazine (67%) (10 ml) a été
graduellement ajouté au sel de potassium KCl(2gm) dissous dans l'eau
(20ml) avec l'agitation et le mélange a été
chauffé au reflux doucement pour 4 heures l'où le sulfure
d'hydrogène a évolué et la couleur du mélange de la
réaction changé en couleur vert-foncé, il a
été alors refroidi et acidifié avec HCl concentré
à pH 1.00. Un produit solide de bis-(4-amino-5-mercapto-4H-[1,2,4]
triazol-3-yl) acide tartrique (b-5 ; 3.5gm ; 70 %)
jaune claire a séparé hors de ce qui a été
filtré, lavé avec de l'eau et cristallisé par
l'éthanol .
Tf = 122 °C
IR (KBr) ,í (cm-1) : 1946.9 (SH),
1605.9 (C=N) , 3330 (NH2), 3041 ( CH alkyl chaine ),
3422.7(OH libre).
1H NMR
(CDCL3) : 2.063(S,1H,SH),6.501 (m.4H, 2CH2O alkyl
chaine ),2.3-2.5 (S,1H ,NH)
13C NMR : 23.78 (m, 2C,C-C) ,
50.72-64.23 (S,1C,CH2O) , 180.36 (S,1C, C=N) ,206.38(S,1C,
C-N)
C-2-5- Préparation de
bis-(4-arabinosidene-amino -5-mercapto-4H-[1,2,4] triazol-3-yl) acide tartrique
(b-6)
Un mélange du bis-(4-amino-5-mercapto-4H-[1,2,4]
triazol-3-yl) acide tartrique
(b-5 ; 1.5
gm ; 005 mole) et de Arabinose (1.75gm ; 0.011mole ) en
éthanol (25mL) a été traité avec HCl
concentré (0.5 ml) et chauffé au reflux pour 4 h.
Rf = 0.72 (éluant E).
Une fois que refroidi, le mélange de la réaction a
été filtré pour donner le produit :
bis-(4-arabinosidene-amino -5-mercapto-4H-[1,2,4] triazol-3-yl)
acide tartrqiue
(b-6 ; 1.13gm ; 75.33% )
sous forme un sirop marron.
IR (KBr) ,í (cm-1) : 2358.48 (SH) ,
1550 (C=N) , 2973.7-2884 (CH alkyl chain), 3631-3334(OH
libre).
1H NMR (CDCL3):
1.091-1.147(m, 9H,CH2O Arabinose) ,2.1 (S.1H,SH), 2.3-2.5
(S,1H,N=CH),
3.7(m,
4H,2CH2O alkyl chaine)
C-3-Les Tests Biologiques
L'activité antibactérienne et antifungique des
déférents composée synthétisés sont
présentées dans le tableau : B-1 et B-2.
les micro-organismes d'essai ont été obtenus
à partir de l'université d'Alexandrie,
(Alexandrie, Egypte). Les produits ont été
pesés et dissous en diméthylsulfoxyde (DMSO) pour préparer
les solutions courantes d'extrait de 10 mg/mL. Les tests de mesure
d'activité antibactérienne et antifungique sont en
général réalisés sur Escherichia
coli ATCC 25922 (Gram négatif) et
Staphylococcus aureus ATCC
25923 (Gram positif) ;
Candida albicans ATCC 60193 (fungique
bactérie), car elles correspondent aux souches de
référence utilisées pour valider les tests de
sensibilité aux notre molécules. Dans le cadre de ce test,
l'activité antibactérienne et antifungique du composé est
évaluée sur souches des bactéries sensibles,
c'est-à dire non résistantes aux notre composés
(b-2),(b-3) ,(b-4) ,(b-5) ,(b-6). Si un composé présente une
activité antibactérienne ou antifungique, la croissance des
bactéries sera inhibée. Dans ce test, les produits les plus
intéressants seront donc ceux dont la CIM est la plus faible,
c'est-à-dire ceux pour lesquels le moins de substance est
nécessaire pour inhiber totalement la croissance cellulaire.
Mode opératoire
La méthode de disque de papier filtre a été
exécutée deux fois en utilisant le milieu frais d'agar de Mueller
Hinton. Ce milieu d'agar a été inoculé avec 0.5mL des
cultures contenant environ 106 CFU/ml (Colony Forming Unit/millilitre.) Des
disques de papier filtre (diamètre de 5 millimètres)
saturés avec des solutions de chaque composé (concentrations 10
mg/mL-1 DMSO) ont été placés sur les
médias indiqués d'agar, Le temps d'incubation était 24 h
au 37°C. Le disque blanc d'essai avec DMSO a été
employé. L'activité inhibitrice a été
évaluée en mesurant le diamètre de la zone claire
observé autour du disque (en millimètre),
La concentration d'inhibition de minimum (CIM) examine
chaque 1 ml de la concentration originale [ c ] (10 mg/ ml-1) dans
DMSO des composés (b-2), (b-3), (b-4), (b-5), (b-6),ont
été diluées avec DMSO pendant cinq fois à :
1/2 [ c ], 1/4[ c ], 1/8 [ c ], 1/16[ c ] Les activités
antibactériennes et antifungique de notre composés
synthétisés ont été déterminées par
la zone d'inhibition constituée par ces composés contre la
contrainte bactérienne d'essai .
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