6.3.4. PRIMERS DE PCR
L'amplification spécifique du locus a été
effectuée pour l'analyse des gènes. La constitution des paires
des primers a servi à amplifier les seconds exons complets et
polymorphes en comparant les séquences restées intactes et qui
confèrent aux régions la diversité.
Une méthode non-radioactive rapide amplifiant le second
exon par PCR a servi à typer les polymorphismes du gène HLA
classe II. Cette méthode a été suivie par la technique
d'hybridation de dot blot reverse comme publié antérieurement
(BUYSSE I. et al., 1993).
Pour amplifier les loci de DRB et DPB1 de la classe II du HLA,
nous avons utilisé :
- le primer DRB - 1(5'-GAT-CCTTCGTGTCCCCACAG - (ACG - 3')
- le primer biotinylé DRB - BR (5' - B - CGCTGCAC -
TGTGAAGCTCTC - 3')
- le primer DPB - 1 (5'CCTCCCCGCAGAGAATTAC - 3')
- le primer biotinylé DPB - BR (5'BGCCGG - CCCAAAG -
CCCTCA - 3').
En fin, 0,5 ìg d'ADN génomique a
été amplifié par 0,2 ìM de chaque primeur dans un
volume de 50 ìl de mélange PCR contenant 50 mM KCl, 10 mM
Tris-HCL pH 8,3, 0,01% gélatine, 1,5 mM MgCL2, 200 ìM
de chaque triphosphate désoxynycléotidique (Pharmacia), 1
unité de Taq ADN polymérase (Gibco BRL). Nous avons
réalisé des conditions d'un cycle thermique par une étape
de dénaturation durant 5 minutes à une température de 94
C, recuire (détremper) durant 1 minute à une température
de 55 C, une élongation de 1 minute à 72 C et une
étape finale d'extension de 10 minutes à 72 C.
6.3.5. ANALYSE STATISTIQUE
La fréquence phénotypique de l'antigène
HLA-DRB1 des patients VIH séropositifs et souffrant de cardiomyopathie
dilatée a été comparée à celle des
témoins.
Nous avons utilisé le Chi-carré (÷) et les
valeurs ajustées de P au nombre d'allèles comme tests
statistiques (SVEYGARD A. et al., 1974).
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