I- Niveau des enzymes
lipolytiques et de la colipase dans l'hépatopancréas de crabe
vert
1- Mise au point des
activités lipasique et phospholipasique dans l'homogénat
Le céphalothorax de crabe débarrassé de
sa cuticule, constitue le tissu biologique renferment
l'hépatopancréas. A 1 g de tissu frais on ajoute 1 ml de tampon
20 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 2 mM benzamidine, pH 8, l'ensemble est
traité à l'aide d'un mixeur (2 x 30s) à froid.
Après centrifugation (10 min, 10000 rpm) l'activité est
mesurée dans le surnageant.
Le taux de lipase de crabe vert mesuré sur une
émulsion de tributyrine dans les conditions optimales est de 50 UI/ g de
tissu frais. Alors que, l'activité phospholipasique mesurée sur
une émulsion de phosphatidylcholine comme substrat, est de l'ordre de 10
UI/g de tissu frais.
Le tableau 2 montre que la lipase de crabe présente un
niveau d'activité relativement faible par rapport à un
invertébré comme celui de scorpion. Alors que les niveaux
d'activité phospholipasique sont comparables.
Tableau 2 : Valeurs moyennes des
activités lipasique et phospholipasique exprimée en UI/g de tissu
frais d'hépatopancréas de crabe ou de scorpion.
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Espèces animales
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Activité lipasique
(UI/ g de tissu frais)
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Activité phospholipasique
(UI/g de tissu frais)
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Crabe vert
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50
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10
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Scorpion (Nacim et al., 2005)
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530
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10
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Ces résultats montrent que le crabe vert est
équipé d'enzymes lipolytiques lui permettant d'hydrolyser les
principaux lipides alimentaires : les triacylglycérols et les
phospholipides.
2- Recherche de la colipase
dans l'hépatopancréas de crabe
Il est bien connu, chez les animaux supérieurs, que la
lipase pancréatique a besoin d'un cofacteur protéique
thermostable pour s'exprimer. On a voulu savoir si la lipase de
l'hépatopancréas de crabe a besoin d'une colipase pour agir, pour
cela un homogénat d'hépatopancréas est traité
à 65°C pendant 30 min pour inactiver la lipase. L'homogénat
est ensuite centrifugé et utilisé pour tester la présence
d'une colipase. L'utilisation d'un excès de cette solution ne permet pas
de réactiver ni la lipase d'hépatopancréas de crabe
inhibée par les sels biliaires ni la lipase pancréatique de dinde
inhibée par NaTDC. Ces résultats sont en faveur de l'absence de
la colipase dans l'hépatopancréas de crabe.
3- Recherche de sels
biliaires dans l'hépatopancréas de crabe
A fin de mieux connaître les éléments
impliqués dans la lipolyse et l'absorption des lipides chez les crabes,
on a testé la présence de sels biliaires au niveau de
l'hépatopancréas. L'expérience réalisée dans
les conditions décrites précédemment montre que
l'hépatopancréas de crabe ne présente pas de sels
biliaires. Ce résultat confirme l'idée que les sels biliaires ne
sont apparus que lorsqu'il y a une séparation de
l'hépatopancréas en deux organes pancréas et foie.
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