Résumé
La plupart des recherches actuelles sont
focalisées à l'étude des lipases des animaux
supérieurs. On ignore jusqu'à ce jour le mode d'action du
système lipolytique des animaux primitifs marins. Pour cette raison
nous nous sommes intéressés, dans ce présent travail,
à la purification et à la caractérisation biochimique de
la lipase de crabe impliquée dans la digestion des lipides
alimentaires.
Les crabes verts, utilisés dans cette
étude, comptent parmi les animaux marins les plus primitifs. Leur
apparition remonte à l'ère secondaire (-250 à -60 millions
d'années).
La lipase digestive de crabe (LDC) a
été purifiée à partir de
l'hépatopancréas. Elle apparaît sous forme d'un polypeptide
de 65 kDa. L'activité spécifique de l'enzyme purifié,
mesurée sur la tributyrine, est de 500 UI/mg à pH 8 et à
60°C.
L'étude de quelques caractéristiques
biochimiques de l'enzyme montre que :
Ø La LDC est une vraie lipase. Elle dégrade les
TG à chaînes longues.
Ø Contrairement à toutes les lipases de
règne animal, La LDC présente une température optimale
d'action de 60°C.
Ø La LDC est stable et active entre pH 6 et 10
après 30 min d'incubation à température ambiante.
Ø Le calcium n'est pas nécessaire pour
déclencher l'activité lipasique.
Ø La LDC ne présente pas d'homologie structurale
ni avec les lipases pancréatiques classiques ni avec une lipase d'un
arthropode terrestre (le scorpion).
Mots clefs :
Animal primitif marin, hépatopancréas, lipase de
crabe, purification, homologie structurale.
ABREVIATIONS
LDC : lipase digestive de crabe
SDL : lipase digestive de scorpion
TPL : lipase pancréatique de dinde
pAbs : anticorps polyclonaux
TG : triacylglycérol
H.O. : huile d'olive
TC4 : tributyrine
NaDC : déoxycholate de sodium
NaTDC : taurodéoxycholate de sodium
EDTA : l'acide éthylène diamine
tétra-acétique
AS : activité spécifique
Da : dalton
MM : masse moléculaire
rpm : rotation par minute
h : heure
min : minute
s : seconde
UI : unité enzymatique internationale
DO : densité optique
SB : sels biliaires
Le présent travail a été effectué
au laboratoire de Biochimie et de
Génie Enzymatique des
Lipases à l'ENIS, sous la direction du
Professeur Youssef-Talèl GARGOURI.
J'exprime toute ma gratitude et ma plus profonde
considération à Monsieur le Professeur
Youssef-Talèl GARGOURI, Directeur du département
du Génie Biologique et du Laboratoire de Biochimie et de Génie
Enzymatique des Lipases, pour avoir bien voulu diriger ce travail. Je le
remercie pour l'attention avec laquelle il a suivi ce travail, pour les
conseils très bénéfiques qu'il m'a prodigués, ainsi
pour la disponibilité dont il a toujours fait preuve à mon
égard.
J'adresse mes sincères remerciements à Monsieur
Slim CHERIF pour sa sympathie, ses fructueuses discussions au
cours de la réalisation de ce travail et pour l'aide considérable
qu'il m'a apporté tout au long de ce stage. Qu'il trouve ici
l'expression de ma vive reconnaissance.
Je remercie Madame Sémia CHAABOUNI,
Professeur à l'ENIS et directrice d'Unité
d'Enzymes et Bioconversion de m'avoir honoré en acceptant de
présider ce jury. Mes remerciements s'adressent également
à Monsieur Samir JAOUA, Professeur au
CBS et directeur de laboratoire du Biopesticides d'avoir
accepté de juger ce travail.
J'adresse mes sincères remerciements à Mr.Nacim
ZOUARI et Mr. Ahmed FENDRI pour les conseils très
bénéfiques et pour l'aide considérable qu'ils m'ont
apporté tout au long de ce stage.
Mes remerciements s'adressent également aux Dr.
Adel SAYARI, Maître assistant à
l'ENIS , Dr. Nabil MILED, Maître
assistant à l'ISBS, et Dr. Sofiane
BEZZINE, Maître de conférence à
l'ISBS, pour leurs fructueuses discussions.
Que tous les membres du LBGEL : Fakher, Maher, Hbib
Horcheni, Hbib Mosbah, Ali, Ikram, Molka, Abir, Hanène Louati,
Hanène Ghamgui, Nedia, Sawsen, Ahlem et Aida trouvent l'expression de
mon profond respect.
Je ne trouverai jamais les mots pour remercier mes
collègues de PFE : Ali, Mohammed, Sana, Souhir, Hajer, Soumaya,
Mazen, Islem, Ines, Amin, Hichem et Arselen, pour leur amitié et les
bons moments que j'ai passé avec eux
Finalement je remercie tous ceux qui ont contribué de
près ou de loin à la réalisation de ce mémoire
Heykel.
A mes chers parents Hédi et Néjia
Sans leurs sacrifices, leur bienveillance,
Je ne pouvais jamais être ce que je suis aujourd'hui
Que Dieu les protège et garde heureux et en bonne
santé.
Au
Hommes de ma vie, mes frères
Bilel, Yassine, Seif el Islem et Nafaa
Que Dieu nous garde toujours unis
A
Mon oncle Mohamed et sa petite famille
Qui m'ont soutenu pendant mon cursus universitaire
A
Mes grands parents
Qu'ils reçoivent toute ma reconnaissance et l'expression
de ma profonde affection
A
Toute ma famille
Mes amis Badr, Arafet, Aymen , Anis et Atef
Tous ceux qui me sont chers
MEMOIRE
Présenté à
L'Ecole Nationale d'Ingénieurs de
Sfax
(Département de Génie
Biologique)
Option : Biotechnologie
en vue de l'obtention
du Diplôme National d'Ingénieur en
Génie Biologique
Par
Heykel TRABELSI
Adel HADJ IBRAHIM
Ce travail a été réalisé
dans le Laboratoire de Biochimie et de Génie Enzymatique des
Lipases
Année Universitaire 2005-2006
Pr. Sémia CHAABOUNI
Président
Pr. Samir JAOUA Membre
Pr. Youssef-Talèl GARGOURI
Encadreur
Mr. Slim CHERIF
Encadreur
Soutenu le 12 Juin 2006, devant la commission
d'examen :
Cycle de Formation d'Ingénieurs dans la
discipline Génie Biologique
Projet de fin d'études
N° d'ordre : 2006-GB
République Tunisienne
Ministère de l'Enseignement Supérieur
Université de Sfax
Ecole Nationale d'Ingénieurs de Sfax
Département de Génie
Biologique
CONTRIBUTION À L'ÉTUDE DU SYSTÈME
LIPOLYTIQUE D'UN ANIMAL MARIN PRIMITIF
LE CRABE VERT
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