4.3 Culture des macrophages péritonéaux :
Les macrophages ont été mis en culture à
raison de 4*105 cellules/puits. Chaque puits est
réalisé en duplicate. Les cellules sont d'abord mises à
adhérer sur microplaque à fond plat pendant 1h30 à
37°C sous atmosphère humide en présence de 5% de CO2.
Ensuite trois lavages au PBS stérile sont effectués afin
d'éliminer les cellules non adhérentes. Puis elles sont à
nouveau mises en culture dans les mêmes conditions pendant 20h à
37°C.
Après 20h d'incubation les surnageant de culture sont
récupérés et centrifugés pendant 5min a 4000 rpm,
ils sont ensuite conservés à -20°C pour le dosage
ultérieur du NO.
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