2.3. Recherche et dénombrement des
COLIFORMES
2.3.1. Principe
Les coliformes se présentent sous forme de
BACILLESGram négatifs (BGN), non SPOROGENES,
oxydasenégative, AERO-ANAEROBIES facultatifs, capables de
croître en présence de sels biliaires et capables de
fermenter le lactose avec production d'acides et de gaz, en
24 à 48 heures à 37°C.Les
coliformes sont considérés comme indices de contamination
fécale. La recherche et le dénombrement des COLIFORMES
peuvent se faire selon deux méthodes de choix :
· Soit en milieu liquide sur BCPL par la
technique du NPP(Nombre le Plus Probable).
· Soit par filtration sur membrane à
0,45 en milieu solide en supposant la disponibilité d'une rampe
de filtration.(Tony HART, Paul SHEARS)
Eaux à analyser
5*01 ml
1*50 ml
5*01 ml
BCPL D/C
Incubation pendant 24 à 48 hdans 37°C
-
+
+
-
-
+
+
+
-
-
-
2
3
1
Schéma 04
16
Définition
Technique en milieu liquide sur BCPL, fait appel
à deux tests consécutifs à savoir :
· Le test de présomption ;
réservé à la recherche des COLIFORMES TOTAUX.
· Le test de confirmation ; encore appelé
test de MAC KENZIEet réservé à larecherche des
COLIFORMES FECAUXà partir des tubes positifs du test de
présomption.
2.3.2. Test de présomption
A partir de l'eau à analyser, porter
aseptiquement :
· 50 ml dans un flacon contenant
50 ml de milieu BCPL D/C muni d'une cloche de
Durham.
· 5 fois 10 ml dans 5 tubes contenant
10 ml de milieu BCPL D/C muni d'une cloche de
Durham.
· 5 fois1 ml dans 5 tubes contenant
10 ml de milieu BCPL S/C muni d'une cloche de
Durham.
Chasse le gaz présent éventuellement dans les
cloches de Durham et bien mélangé le milieu et
l'inoculum.(Tony HART, Paul SHEARS)
2.3.2.1. Incubation
L'incubation se fait à 37°C pendant
24 à 48 h.
2.3.2.2. Lecture
Sont considérés comme positifs les tubes
présentant à la fois :
· Un dégagement gazeux (supérieur au
1/10 de la hauteur de la cloche).
· Un trouble microbien accompagné d'un virage du
milieu au jaune(ce qui constitue le témoin de la
fermentation du lactose présent dans le milieu).
Ces deux caractères étant témoins de la
fermentation du lactose dans les conditions
opératoires décrites.(Tony HART, Paul SHEARS)
2.3.2.3. Illustration
Le nombre caractéristique est donc 132 ; ce
qui correspond sur la table de MAC GRADY au nombre 14. On
considère alors qu'il y a 14 COLIFORMES par 100 ml
d'eau à analyser.
|
Inoculum
|
Test de présomption
|
Nombre Caractéristique
|
|
1*50 ml
|
+
|
1
|
|
5*10 ml
|
+
|
3
|
|
+
|
|
+
|
|
-
|
|
-
|
|
5*01 ml
|
+
|
2
|
|
+
|
|
-
|
|
-
|
|
-
|
|
Tableau 02
|
17
| 
