IV. LA
CHROMATOGRAPHIE
VI.1. Définition
La chromatographie est une technique d'analyse qualitative et
quantitative de la chimie analytique dans laquelle l'échantillon
contenant une ou plusieurs espèces est entraîné par un
courant de phase mobile (liquide, gaz ou fluide supercritique) le long d'une
phase stationnaire (papier, gélatine, silice, polymère, silice
greffée etc.). Chaque espèce se déplace à une
vitesse propre dépendant de ses caractéristiques et de celles des
deux phases. (MAHUZIER et HAMON, 1990).
VI.2. Principe
La chromatographie est une méthode de séparation
des constituants d'un mélange même très complexe. Il existe
trois principaux types de chromatographie:
· la chromatographie en phase gazeuse (CPG)
· la chromatographie en phase liquide à haute
performance (HPLC)
· la chromatographie en couche mince (CCM).
Les deux premières méthodes peuvent être
assez largement décrites par des théories communes. Dans les deux
cas, un fluide appelé phase mobile parcourt un tube appelé
colonne. Cette colonne peut contenir des "granulés" poreux (colonne
remplie) ou être recouverte à l'intérieur d'un film mince
(colonne capillaire). Dans les deux cas, la colonne est appelée phase
stationnaire. A l'instant initial, le mélange à séparer
est injecté à l'entrée de la colonne où il se dilue
dans la phase mobile qui l'entraîne à travers la colonne.
Si la phase stationnaire a été bien choisie, les
constituants du mélange, appelés généralement les
solutés, sont inégalement retenus lors de la traversée de
la colonne (Université de Nancy-Metz, 9 juin 2010).
De ce phénomène appelé rétention
il résulte que les constituants du mélange injecté se
déplacent tous moins vite que la phase mobile et que leurs vitesses de
déplacement sont différentes. Ils sont ainsi élués
de la colonne les uns après les autres et donc séparés.
Un détecteur placé à la sortie de la
colonne couplé à un enregistreur permet d'obtenir un tracé
appelé chromatogramme. En effet, il dirige sur un enregistreur un signal
constant appelé ligne de base en présence du fluide porteur seul
; au passage de chaque soluté séparé il conduit dans le
temps à l'enregistrement d'un pic.
Notons qu'il existe plusieurs types de détecteurs
(BELLO-PE'REZ et al, 1998) :
ü Détecteur à absorption UV ou visible
ü Détecteur à indice de
réfraction
ü Détecteur UV à barrette de diodes
(DAD)
ü Détecteur à fluorescence
ü Détecteur de type spectromètre de masse
(MS)
ü Détecteur évaporatif à diffusion
de la lumière (DEDL)
ü Détecteur électrochimique (DEC).
ü Dans des conditions chromatographiques données,
le "temps de rétention" (temps au bout duquel un composé est
élué de la colonne et détecté), caractérise
qualitativement une substance. L'amplitude de ces pics, ou encore l'aire
limitée par ces pics et la prolongation de la ligne de base permet de
mesurer la concentration de chaque soluté dans le mélange
injecté. (Académie de rouan, 2001)
Figure 4:
Schéma descriptif du chromatographe HPLC ( Académie de rouan,
2001)-
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