4. Analyse statistique
L'analyse de la variance (anova) a été
utilisée pour déterminer les différences significatives
entre les échantillons aux diférents jours de stockage (logiciel
Stat box version 6.0.). La différence entre les moyennes est
considérée significative à un niveau p<0.05.
Resultats
&
Discussion
1. Rendement en huiles essentielles
Durant notre travail, les parties des végétaux
faisant l'objet d'extraction sont constituées par un matériel
végétal sec (boutons floraux séchés du giroflier)
et frais (myrte et eucalyptus).
Tableau VII : Le rendement (%) en H.E. des
différentes plantes utilisées.
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H.E.
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Clous de Girofle (C.G.)
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Eucalyptus
|
Myrte
|
|
Rendement
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3,5
|
0,048
|
0,056
|
Fig. 25: Rendement en H.E.obtenues par
hydrodistillation.
La figure 25 montre les résultats des différents
rendements en H.E. des différentes espèces
végétales utilisées dans cette étude.
D'après cette figure, il s'avère que le rendement en H.E.
extraite par hydrodistillation à l'échelle de laboratoire
à partir des Clous de girofle est de 3,5 %. Ce résultat ne
coïncide pas avec les résultats obtenus par d'autres auteurs qui
ont procédé par la même technique d'hydrodistillation.
ANDREA (2004) a obtenu un résultat de (14 à 20 %) en utilisant la
même technique d'hydrodistillation.
Cette différence de rendement est probablement due
à une perte d'huile dans la phase aqueuse du distillat et la
simplicité de notre dispositif d'hydrodistillation. Cependant, les
rendements en H.E. de Myrte et de l'Eucalyptus ont été presque
nuls quand l'extraction se faisait à l'échelle de laboratoire,
cependant les rendements en H.E. de ces deux plantes ont été
améliorés de 0.056 % et 0.048 %, respectivement quand
l'extraction est de type semiindustriel. On peut dire qu'en terme de
quantité et, malgré que ces pourcentages semblent
inférieurs mais dans la pratique restent satisfaisants pour mener
à bien une telle étude, car les quantités en H.E.
nécessaires sont de l'ordre des tl. En termes de valeurs, le rendement
en H.E. de Clous de Girofle est significativement (P<5%) meilleur par
rapport aux rendements obtenus en H.E. avec les deux autres plantes à
savoir le Myrte et l'Eucalyptus. Selon certains auteurs, la composition
chimique et le rendement en H.E. varient suivant diverses conditions :
la méthode employée, les parties
végétales utilisées et les produits et réactifs
utilisés pendant l'extraction, l'environnement, le génotype de la
plante, son origine géographique, la période de récolte de
cette plante, le degré de séchage, les conditions de
séchage, la température et la durée de séchage,
présence de parasites, de virus et mauvaises herbes (BAJPAI et
al., 2008; KELEN et al., 2008).
2. Tests de sensibilité microbienne envers les
H.E.
Ces tests consistent à déterminer la
sensibilité des microorganismes vis-à-vis des H.E. Nous avons
testé l'activité de quatre H.E par les méthodes de
diffusion sur gélose, diffusion en puits et microatmosphère. Les
mesures des halos d'inhibitions nous ont permis de classer les bactéries
suivant leur degré de sensibilité à l'H.E.
donnée.
Les résultats des témoins sont
représentés dans la figure 26.
Fig. 26: Photos montrant les témoins
réalisés par la méthode d'aromatogramme.
Les figures ci-dessous montrent les zones d'inhibition
observées avec l'ensemble des bactéries pour chaque H.E. par les
trois méthodes adoptées. Les tableaux renseignent sur les
diamètres des zones d'inhibition en mm qui sont la moyenne des deux
essais.
2.1- Essais avec les Clous de Girofle -
Méthode d'aromatogramme
Fig. 27: Photos montrant l'activité
antimicrobienne de l'H.E. à l'état pur des CG par
la
méthode d'aromatogramme.
- Méthode de diffusion en puits
Fig. 28: Photos montrant l'activité
antimicrobienne de l'H.E. des CG diluée à 1/2 par
la
méthode de puits.
Le tableau suivant représente les résultats des
moyennes de deux essais pour chacune des méthodes testées.
Tableau VIII: Halos d'inhibition (mm)
provoqués par l'H.E. des Clous de girofle.
|
Méthodes
Souches
|
Méthode de
diffusion sur
disque
(huile pure)
|
Méthode de
diffusion en
puits
(huile diluée à 1/2)
|
|
S. aureus
|
10,29 (sensible: +)
|
09,03 (sensible: +)
|
|
E. coli
|
16,31 (très
sensible:++)
|
10,96 (sensible: +)
|
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S. flexneri
|
12,41 (sensible: +)
|
9,66 (sensible: +)
|
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S. paratyphi A
|
12,47 (sensible: +)
|
12,36 (sensible: +)
|
|
B. cereus
|
15,34 (très sensible:++)
|
20,43 (extrêmement
sensible: +++)
|
|
P. aeruginosa
|
00,00 (résistante)
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Non déterminée
|
Les valeurs obtenues en puits diffèrent des
résultats des aromatogrammes. Vis-à-vis du S.
paratyphi A, les résultats obtenus par les deux méthodes
ne sont pas significativement différents. Cependant, on notera une
grande signification entre les valeurs obtenues vis-à-vis des autres
espèces. On peut en conclure que la méthode de diffusion en puits
ne pourrait raisonnablement se substituer à celle des aromatogrammes
pour le cas des Clous de girofle. Il faut noter que pour B. cereus, la
méthode de diffusion en puits, l'huile des Clous de girofle est la plus
active avec un halo d'inhibition de 20,43 mm de ~ devant celui de diffusion sur
disque égale à 15,34 mm. D'après les résultats
d'aromatogrammes, nous pouvons dire que toutes les espèces
testées présentent une certaine sensibilité
vis-à-vis de l'H.E. des Clous de girofle. Cependant E. coli et
B. cereus se sont révélées très sensibles,
tandis que S. aureus, S. flexneri et S. paratyphi A
se sont révélées sensibles à l'exception de P.
aeruginosa qui se révèle résistante.
Nous observons également que même lorsque l'H.E.
est diluée à 50% pour la méthode en puits, toutes les
espèces ont montré une sensibilité envers cette huile
excepté la souche B. cereus qui a montré une très
grande sensibilité.
Après 24 h d'incubation des boîtes du test de
diffusion en puits, on s'est rendu compte que leur fond (en plastique) qui
était en contact avec l'H.E. des C.G. avait fondu. Pour cela, nous
émettons une hypothèse : certaines molécules des huiles
des C.G. auraient un pouvoir corrosif (l'eugénol). Ceci a
été confirmé par les travaux de BACHELOT et ses
collaborateurs (2006), ayant conservé cette H.E. dans des tubes en
plastiques et qui ont observé le même phénomène.
De récentes études (PALMER et al.,
2000), ont démontré que les H.E. des C.G. se sont fortement
antimicrobiennes. Cette activité pourrait être attribuée
à son composé majoritaire qui est "l'eugénol" . Les
travaux de VALERO et GINER (2006), ont prouvé que l'eugénol parmi
d'autres composés a provoqué l'inhibition complète de la
croissance de B. cereus. Les mêmes auteurs ont constaté
également qu'aucune croissance n'était observée
après 60 jours en présence de 150 ul d'eugénol/100 mL de
bouillon. THOROSKI et al. (1989), ont démontré que
l'eugénol à faible concentration empêchait la production
d'amylase et de protéase par B. cereus, ils ont
également noté que l'activité inhibitrice de ce
composé est due à son action directe sur la
détérioration de la membrane cellulaire de la bactérie
cible. BURT, (2004) et OUSSALAH et al. (2005) ont
démontré que l'H.E. des Clous de girofle contenant 78%
d'eugénol était effective contre quatre bactéries
pathogènes (E. coli O157:H7, Listeria monocytogenes
(L. monocytogenes), S. Typhimurium et S.
aureus). À une concentration de 1% : vol/vol, l'H.E des Clous de
girofle exerce une action bactéricide (LEUSCHNER et LELSCH, 2003). Selon
ces mêmes auteurs, la charge initiale de L. monocytogenes
égale à 6.77 Log ufc/mL passe à 1 log ufc/mL en
présence de cette H.E. à une température d'incubation
égale à 37 °C, cependant lorsque la température
d'incubation était de 4 °C, la réduction de la charge
bactérienne a atteint une valeur de 3 Log ufc/mL.
MOLEYAR et NARASIMHAM (1992), ont observé qu'un
mélange de cinnamaldéhyde et d'eugénol à 250 et 500
ug/mL, respectivement empêchait complètement la croissance de
Staphylocoque sp., Micrococcus sp., Bacillus sp., et
Enterobacter sp. pendant plus de 30 jours, alors que les substrats
appliqués individuellement n'ont pas empêché le
développement microbien.
A la lumière de tous ces travaux, l'extrait des Clous
de Girofle présente un large spectre d'activité antimicrobienne
d'où l'importance de cette huile comme étant un conservateur,
très efficace pour empêcher le développement microbien
surtout quand il s'agit de protéger la santé vis-à-vis de
la présence des pathogènes.
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