I.3) Les
enzymes.......................................................................26
I.3.1) Les enzymes de
restrictions...............................................26
I.3.2) Les autres
enzymes.........................................................26
I.4) Les marqueurs de poids
moléculaires..........................................27
I.4.1) Les marqueurs de poids
moléculaires d'ADN.........................27
I.4.2) Les marqueurs de poids
moléculaires de protéines....................28
I.5) Les
oligonucléotides..............................................................28
I.6) Autres
matériels...................................................................28
II) Méthodes
II.1)
PCR.................................................................................29
II.2) Electrophorèse sur gel
d'agarose...............................................29
II.3) Purification d'ADN sur gel
d'agarose.........................................30
II.4) La
digestion.......................................................................30
II.5) La
ligation........................................................................31
II.6) Transformation des
bactéries...................................................31
II.7) Colonie
PCR.....................................................................32
II.8) Préparation des
plasmides......................................................32
II.8.1) Préculture
bactérienne....................................................32
II.8.2) Extraction de l'ADN
plasmidique.......................................32
II.9) Eléctroporation de la levure
Pichia pastoris..................................33
II.10) Production de la protéine
recombinante dans Pichia pastoris............33
II.11) Electrophorèse des
protéines sur gel polyacrylamide en présence de
SDS..............................................................................34
II.12) Immunoblot et
révélation par
ECL................................................35
C] Résultats et interprétation
I. Clonage du gène Rv3874 dans le vecteur
pPICZáA........................................37
I.1) Stratégie de
clonage...............................................................37
I.2)
PCR..................................................................................38
| 
