II.2.1.3.2. Procédure
du test
Vingt-cinq microlitres (25ìL) de réactif
contrôle ou de réactif spécifique sont ajoutés dans
les cupules appropriées.
Le réactif contrôle est un tampon de couleur
jaune contenant du sérum de cheval, de chèvre, du sérum
bovin et humain non réactifs pour l'Ag HBs ainsi que des
détergents conservateurs : ProClin R 300 (0.05 %).
Le réactif spécifique est un tampon de couleur
rouge contenant des anticorps spécifiques de cheval dirigés
contre l'Ag HBs, ainsi que des détergents conservateurs : ProClin R 300
(0.05 %).
Soixante-quinze microlitres (75ìL) de contrôle
Murex Ag HBs et d'échantillon à analyser sont ajoutés dans
les cupules.
La plaque est ensuite remuée à l'aide d'un
agitateur pour plaques pendant 10 secondes. Elle peut également
être agitée manuellement en tapotant doucement sur le
côté pendant 10 secondes. (33)
A partir de cette étape le test est effectué
d'une manière normale (même procédure qu'ELISA)
Figure
7:Configuration du test de confirmation pour la détection
des AgHBs
Source : (Fatima B, 2016)
II.2.1.3.3. Lecture des
résultats
Pour la lecture des résultats, on calcule d'abord la
densité optique moyenne du contrôle négatif incubé,
avec le réactif spécifique et le réactif contrôle.
(33)
Exemple : DO du contrôle négatif avec le
réactif spécifique (NS) =0.08 DO du contrôle négatif
avec le réactif contrôle (NC) = 0.086
La moyenne du contrôle négatif = 0.083
La valeur seuil est ensuite calculée comme étant
égale à la densité optique moyenne des contrôles
négatifs + 0.05.
Le pourcentage d'inhibition du contrôle positif avec le
réactif spécifique est calculé comme suit :
ü Exemple : DO du contrôle positif avec le
réactif contrôle (PC) = 1.061 DO du contrôle positif avec
le réactif spécifique (PS) = 0.121 Inhibition par le
réactif spécifique : (PC- NC) - (PS- NS) x100 / (PC- NC) =
95.8%
L'inhibition des échantillons réactifs se
calcule selon l'exemple suivant :
ü DO de l'échantillon avec le réactif
contrôle (EC) = 0.648. DO de l'échantillon avec le réactif
spécifique (ES) = 0.099. L'inhibition par le réactif
spécifique = (EC -NC) - (ES- NS) x100 / (EC- NC) =96.6%
II.2.1.3.4.
Interprétation des résultats
Pour qu'un échantillon puisse être
considéré comme confirmé réactif par le test Murex
HBsAg, les critères suivants doivent être remplis (33) :
- la densité optique avec le réactif
contrôle doit être supérieure ou égale à la
valeur seuil.
- l'inhibition par le réactif spécifique
doit être supérieure ou égale à 50%.
Pour l'échantillon fortement réactif, les
pourcentages peuvent parfois dépasser les 100%. Si la densité
optique dans la cupule contrôle est inférieure à 2, les
échantillons fournissant une inhibition inférieure à 50%
par le réactif spécifique sont considérés comme
négatifs et donc faussement réactif par le test Murex HBsAg.
Un pourcentage d'inhibition négatif peut être
obtenu et doit également être considéré comme un
résultat négatif (le contrôle et le spécifique
seront tous négatifs).
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